蜂毒肽MP-1抗菌-抗內(nèi)毒素作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:明確蜂毒肽Mastoparan-1(MP-1)的抗菌/抗內(nèi)毒素(LPS)作用以及對(duì)膿毒癥模型小鼠的保護(hù)作用,并探討其可能的機(jī)制.方法:1.MP-1抗菌作用的研究(1)微量稀釋法檢測(cè)MP-1對(duì)18株細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC);(2)透射電鏡觀察MP-1(100μg/ml)對(duì)大腸桿菌(E.coli)ATCC25922的形態(tài)的影響.2.MP-1對(duì)LPS中和作用的研究(1)應(yīng)用生物傳感器觀察MP-1與LPS、類(lèi)脂

2、A(Lipid A)的結(jié)合作用并計(jì)算其平衡解離常數(shù)(Kd) :(2)應(yīng)用動(dòng)態(tài)濁度法鱟試驗(yàn)測(cè)定MP-1中和LPS的能力;(3)采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)MP-1對(duì)LPS(100mg/ml)刺激的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(peritoneal macrophages,PMφ)Toll樣受體4(Toll-like receptor4,TLR4)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)

3、及白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA表達(dá)的影響.3.MP-1對(duì)LPS(400ng/ml)刺激的小鼠PMφ呼吸爆發(fā)的影響(1)采用細(xì)胞色素C氧化還原法檢測(cè)超氧陰離子(O<,2>·)的產(chǎn)生量和還原型輔酶II(NADPH)氧化酶的活性;(2)熒光法檢測(cè)過(guò)氧化氫(H<,2>O<,2>)的產(chǎn)生量.4.MP-1對(duì)膿毒癥模型小鼠的保護(hù)作用觀察MP-1(3mg/kg)對(duì)致死劑量E.coli ATCC25922 活菌(1×10

4、<'11>CFU/kg)、死菌(1×10<'11>CFU/kg)或IPS(20mg/kg)攻擊小鼠的保護(hù)作用.結(jié)論:1.MP-1具有一定的抗菌活性,它對(duì)E.coliATCC25922的殺菌作用可能與細(xì)菌外膜結(jié)構(gòu)破壞、通透性增加有關(guān);2.MP-1對(duì)LPS具有中和作用,能夠抑制LPS介導(dǎo)的鱟試劑凝結(jié)反應(yīng)及小鼠PMΦ的TNF-α及IL-mRNA的表達(dá);3.MP-1可顯著抑制PMΦ細(xì)胞膜NADPH氧化酶的活性,從而抑制IPS介導(dǎo)的PMΦ呼吸爆發(fā)