巴斯德梭菌（Clostridium pasteurianum）甘油脫水酶基因的克隆表達、純化及酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、1，3-丙二醇是一種重要的化工原料，它可以作為多種聚酯和聚氨酯的單體，在食品、制藥等方面也有廣泛的應(yīng)用。甘油脫水酶是1，3-丙二醇生物合成途徑中的限速酶，它的高效表達對提高1，3-丙二醇的轉(zhuǎn)化速率起著至關(guān)重要的作用。因此通過對甘油脫水酶基因工程的研究，了解甘油脫水酶生物學(xué)意義及催化機理，從而提高1，3-丙二醇的生產(chǎn)效率，在我國實現(xiàn)生物轉(zhuǎn)化1，3-丙二醇的工業(yè)化生產(chǎn)有重要意義。 本論文利用PCR技術(shù)從巴斯德梭菌(Clostridi

2、umpasteurianum)擴增出編碼甘油脫水酶基因(dhaBCE)，在大腸桿菌中得到了高效表達，經(jīng)SDS-PAGE分析結(jié)果顯示分別有66kD、21kD、16kD三條特異性蛋白條帶出現(xiàn)。利用金屬鎳親和層析及S-300H凝膠層析將重組蛋白進行分離純化，所得純酶的比活為4.26U/mg。重組酶的最適反應(yīng)溫度范圍為42～44℃，最適作用PH范圍為9.10～9.50，其對三個底物結(jié)構(gòu)類似物的Km值分別是，1，2-丙二醇0.38mmol/L，甘

3、油0.29mmol/L，1，2-乙二醇2.0mmol/L。酶對反應(yīng)中必需的輔酶B12的Km值為0.22μmol/L。 1998年Macis等人首次對C.pasteurianumDSM525菌株中編碼甘油脫水酶的基因進行了克隆、序列分析及表達的研究，未見更深入詳細的報道。本論文報道了巴斯德梭菌(C/ostridiumpasteurianum)甘油脫水酶基因的克隆、表達和純化過程以及酶學(xué)性質(zhì)的研究，進一步完善了對C.pasteuri