PPARα的激動(dòng)可能與小檗堿的降脂作用有關(guān).pdf

1、目的： 觀察Ber對(duì)脂質(zhì)代謝紊亂的防治作用，并探討其降脂作用與PPARα之間的關(guān)系。 方法： 1.培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2，給予不同濃度Ber(10-6mol/l、3×10-6mol/l、10-5mol/1、3×10-5mol/l、10-4mol/l、3×10-4mol/l)，作用細(xì)胞24 h后應(yīng)用RT-PCR觀察對(duì)HepG2細(xì)胞PPARa及其調(diào)控基因CPTI A mRNA表達(dá)水平的影響，確定Ber作用的最佳濃度

2、。然后用Ber最佳濃度作用HepG2細(xì)胞6 h、12 h、24 h、48 h和72 h后，應(yīng)用RT-PCR觀察對(duì)HepG2 CPT I A mRNA表達(dá)水平的影響，確定Ber最佳作用時(shí)間。 2.培養(yǎng)人肝癌HepG2，給予Ber(3×10-5mol/l)+或不+MK886(10-5mol/l)和FF(2×10-5mol/l)+或不+MK886(10-5mol/l)分別作用24 h后，采用RT-PCR檢測(cè)各用藥組細(xì)胞CPT I A

3、mRNA表達(dá)水平。 3.采用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)各用藥組細(xì)胞CPT IA蛋白表達(dá)水平。 4.采用高脂加高膽固醇飼料，建立大鼠高脂模型。實(shí)驗(yàn)分5組：(1)對(duì)照組(普通飼料)；(2)模型組(高脂加高膽固醇飼料)；(3)Ber低劑量組(高脂加高膽固醇飼料+Ber 60 mg/kg)；(4)Ber高劑量組(高脂加高膽固醇飼料+Ber 300 mg/kg)；(5)洛伐他汀組(高脂加高膽固醇飼料+70 m

4、g/kg)。每組各8只大鼠。20周后尾部采血，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)，確定高脂模型建立，觀察各組藥物對(duì)大鼠血脂變化的影響。 5.采用RT-PCR檢測(cè)各組動(dòng)物肝臟PPARα和CPT I A mRNA表達(dá)水平。 6.采用Western blot檢測(cè)各組動(dòng)物CPT I A蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.Ber顯著呈濃度和時(shí)間依賴性

5、促進(jìn)CPT I A mRNA的表達(dá)，但是對(duì)PPARa mRNA表達(dá)沒有顯著影響。 2.Ber(3×10-5mol/1)對(duì)CPT I AmRNA和蛋白表達(dá)有明顯促進(jìn)作用(P＜0.01)；PPARα特異激動(dòng)劑FF(2×10-5mol/1)也明顯促進(jìn)CPT I AmRNA和蛋白表達(dá)(P＜0.01)；PPARα特異拮抗劑MK-886預(yù)處理細(xì)胞后阻斷了FF和Ber上述作用。 3.Ber 60 mg/kg和300 mg/kg每天給予

6、明顯降低高脂大鼠血漿TC、TG和LDL-C水平；其作用與洛伐他汀無顯著差異。 4.Ber高、低劑量組明顯促進(jìn)HepG2 CPT I A mRNA和蛋白表達(dá)：但并不明顯影響PPARα mRNA和蛋白表達(dá)；洛伐他汀對(duì)HepG2的PPARα和CPT I A mRNA和蛋白表達(dá)無明顯影響。 結(jié)論： Ber能顯著降低高脂血癥大鼠血漿TC和LDL水平；其作用原理可能與激動(dòng)PPARα，由此促進(jìn)以CPT I A為代表的，受PPA