當(dāng)歸芍藥散治療原發(fā)性痛經(jīng)的效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、原發(fā)性痛經(jīng)為婦科常見疾病，臨床常采用NASIDS、口服避孕藥、Ca2+拮抗劑等治療，由于存在對消化道、心臟或肝腎等不良反應(yīng)而限制了臨床應(yīng)用。當(dāng)歸芍藥散系張仲景《金匱要略》方，由當(dāng)歸、芍藥、川芎、白術(shù)、茯苓、澤瀉組成，主治妊娠“腹中疼痛”，以及婦人雜病“腹中諸疾痛”，后世醫(yī)家常用本方治療婦科疾病。本文在前期建立了原發(fā)性痛經(jīng)器官模型的工作基礎(chǔ)上，遵循方劑配伍與方病結(jié)合原則，采用多效應(yīng)評價平臺和活性追蹤與化學(xué)分離分析緊密結(jié)合的思路，對當(dāng)歸芍藥

2、散治療原發(fā)性痛經(jīng)的效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)進行研究。本論文工作主要包括三部分：
　　 一、樣品制備方法研究和樣品制備：
　　 全方水提取物和50％乙醇提取物經(jīng)小鼠離體子宮原發(fā)性痛經(jīng)模型效應(yīng)評價和化學(xué)成分分析，結(jié)果顯示，當(dāng)歸芍藥散治療原發(fā)性痛經(jīng)的主要效應(yīng)物質(zhì)可能為醇溶性成分，僅采用水提取均有可能遺漏部分效應(yīng)成分?；诖搜芯拷Y(jié)果，我們制定了水提醇沉、殘渣醇提、大孔吸附樹脂吸附洗脫分離和溶劑萃取結(jié)合的樣品制備方法，將全方系統(tǒng)分為21個部位

3、，為進一步的系統(tǒng)生物效應(yīng)評價和化學(xué)成分分析奠定基礎(chǔ)。
　　 二、當(dāng)歸芍藥散治療原發(fā)性痛經(jīng)效應(yīng)評價平臺的建立和各分離部位的效應(yīng)評價：
　　 ①建立小鼠離體子宮原發(fā)性痛經(jīng)模型：催產(chǎn)素誘發(fā)離體子宮強烈收縮，模擬痛經(jīng)時子宮的痙攣狀態(tài)，用于當(dāng)歸芍藥散治療原發(fā)性痛經(jīng)效應(yīng)部位的篩選；②建立環(huán)氧化酶-Ⅱ抑制劑篩選平臺：比較ELISA、放免法、熒光活性法、比色法等檢測NIH3T3細(xì)胞株、RAW264.7細(xì)胞株、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞中PGE2的

4、含量或環(huán)氧化酶-Ⅱ的活性時方法的優(yōu)點，以比色法最為簡便、快捷、高效，適合環(huán)氧化酶-Ⅱ抑制劑的高通量篩選和當(dāng)歸芍藥散效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)研究。③當(dāng)歸芍藥散對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞NO產(chǎn)量的調(diào)控：選擇與原發(fā)性痛經(jīng)和炎癥的發(fā)生、體內(nèi)PGs的產(chǎn)生等高度生物相關(guān)NO為對象，Griess法檢測含量，研究當(dāng)歸芍藥散對其NO產(chǎn)量的調(diào)控。
　　 上述三個生物效應(yīng)評價方法結(jié)果可靠、穩(wěn)定，且后兩個具備高通量優(yōu)勢，適合作為當(dāng)歸芍藥散治療原發(fā)性痛經(jīng)效應(yīng)物質(zhì)基礎(chǔ)的篩選評

5、價平臺。對所分離得到的各化學(xué)物質(zhì)部位的生物效應(yīng)進行評價，結(jié)果發(fā)現(xiàn)主要有效部位為：當(dāng)歸芍藥散揮發(fā)油部位(DSS-1)、大孔吸附樹脂30％、40％、50％、70％乙醇洗脫部位(DSS-10、DSS-11、DSS-12、DSS-14)和水提殘渣90％乙醇提取石油醚萃取部位(DSS-18)。
　　 三、當(dāng)歸芍藥散治療原發(fā)性痛經(jīng)效應(yīng)物質(zhì)部位的成分分析：
　　 采用HPLC-DAD-ESI-MS、GC-MS、對照品對照等方法并結(jié)合文

6、獻，對當(dāng)歸芍藥散效應(yīng)部位進行成分分析。結(jié)果表明，當(dāng)歸芍藥散揮發(fā)油(DSS-1)主要化學(xué)成分為桉葉烯、古香油烯、大根香葉烯、匙葉桉油烯醇、蒼術(shù)酮、丁烯基苯酞內(nèi)酯、z-藁本內(nèi)酯、新蛇床內(nèi)酯、川芎內(nèi)酯A，且以藁本內(nèi)酯(42.75％)的含量最大。大孔吸附樹脂吸附30％、40％乙醇洗脫(DSS-10，DSS-11)主要化學(xué)成分為芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷，50％乙醇洗脫(DSS-12)主要化學(xué)成分為阿魏酸，70％乙醇洗脫(DSS-14)和水提殘渣90％乙

7、醇提取石油醚萃取部位(DSS-18)中白術(shù)內(nèi)酯-Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯-Ⅲ含量占較大比例。
　　 上述化學(xué)成分在當(dāng)歸芍藥散治療原發(fā)性痛經(jīng)效應(yīng)評價平臺中效應(yīng)顯著，為闡明其作用機理和相互影響，對效應(yīng)部位有待進一步分離分析和定量研究，對所得化合物進行效應(yīng)研究，最終為揭示配伍規(guī)律和應(yīng)用開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)，并為方劑研究思路提供參考。
　　 本文創(chuàng)新點①研究思路：遵循“方劑配伍與方病結(jié)合”，采用“化學(xué)分離分析與多指標(biāo)效應(yīng)評價結(jié)合”