當(dāng)歸-川芎藥對治療小鼠原發(fā)性痛經(jīng)模型的實驗研究.pdf

1、目的：
　　原發(fā)性痛經(jīng)（Primary Dysmenorrhea，PD）是婦科最常見的疾病之一，臨床以周期性下腹部疼痛、墜脹為主癥，嚴(yán)重影響患者的學(xué)習(xí)、工作和生活。已知前列腺素（prostaglandin，PG）與婦科疼痛的關(guān)系密切，近年的研究發(fā)現(xiàn)，在PD的發(fā)病機(jī)制中，PGF2α含量變化是至關(guān)重要的一環(huán)，而催產(chǎn)素（OT）、催產(chǎn)素受體（OTR）、雌二醇（E2）、孕酮（P）、血管加壓素（AVP）等因子亦可通過調(diào)控PGF2α含量變化而發(fā)

2、揮重要作用。本研究通過建立原發(fā)性痛經(jīng)動物模型，分析PGF2α、PGE2、OT、OTR、E2、P、AVP等因子在實驗小鼠子宮組織中的表達(dá)，以探討原發(fā)性痛經(jīng)疼痛發(fā)生的機(jī)制；并對實驗小鼠采用當(dāng)歸-川芎藥對進(jìn)行治療，探討抑制PGF2α含量升高的最佳配伍及當(dāng)歸-川芎對原發(fā)性痛經(jīng)起作用的機(jī)制。
　　方法：
　　選用健康雌性小鼠70只，昆明種，SPF級，重約(18~22) g，按當(dāng)歸、川芎的配伍比例不同而隨機(jī)分組：藥物1：1組(3.03g

3、/kg)、藥物2：1組(2.28g/kg)、藥物3：1組(2.02g/kg)、藥物3：2組(2.58g/kg)、益母草膏組（0.60g/kg)、模型組、空白對照組。
　　采用補(bǔ)佳樂(0.5mg/kg)聯(lián)合催產(chǎn)素(2IU/只)建立原發(fā)性痛經(jīng)模型，連續(xù)給藥12天。具體方案如下：藥物組：上午灌胃對應(yīng)藥物20ml·kg-1·d-1，下午灌胃補(bǔ)佳樂；益母草膏組：上午灌胃益母草膏20ml·kg-1·d-1，下午灌胃補(bǔ)佳樂；模型組：上午灌胃生理

4、鹽水20ml·kg-1·d-1，下午灌胃補(bǔ)佳樂；空白對照組：灌胃生理鹽水20ml·kg-1·d-1，每天兩次。第12天末次灌胃補(bǔ)佳樂后1小時再腹腔注射催產(chǎn)素2IU/只(0.2ml)，誘發(fā)扭體反應(yīng)，空白對照組小鼠腹腔注射生理鹽水0.2ml/只。觀察腹腔注射催產(chǎn)素后30分鐘內(nèi)各組小鼠的扭體潛伏期及扭體次數(shù)。行為學(xué)指標(biāo)觀測完畢后，處死動物。剝離小鼠子宮，部分組織立即置于液氮中后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱用于Real Time PCR檢測、Western

5、-blot檢測，另一部分組織勻漿取上清液用于ELISA法檢測。
　　結(jié)果：
　　1、扭體反應(yīng)
　　除空白對照組外，各組小鼠均產(chǎn)生扭體反應(yīng)，扭體發(fā)生率為100％。與模型組比較，藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組小鼠扭體潛伏期明顯延長，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；扭體次數(shù)顯著減少，差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(藥物2：1組為P<0.01，其余組均為P<0.05)。各治療組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)

6、意義(P>0.05)。
　　2、 OTR表達(dá)
　　2.1、 Western-blot檢測OTR蛋白表達(dá)
　　與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)OTR蛋白表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（模型組：P<0.01，而藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組：P<0.05）。與模型組比較，藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組OTR蛋白表達(dá)降低，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（

7、P<0.01）。各治療組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.2、 Real Time PCR檢測OTR mRNA的表達(dá)
　　與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)OTR mRNA表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（模型組、益母草膏組：P<0.01，而藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組：P<0.05）。與模型組比較，各給藥組小鼠子宮內(nèi)OTR mRNA表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（益母草膏組：P<0

8、.05，而藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組：P<0.01）。與益母草膏組比較，藥物2：1組OTR mRNA表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。各藥物組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3、 ELISA法檢測組織勻漿中PGF2α、PGE2、OT、E2、P、AVP的水平
　　PGF2α：與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)PGF2α水平增加，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）

9、。與模型組比較，藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組小鼠子宮內(nèi)PGF2α含量降低，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與益母草膏組比較，藥物2：1組小鼠子宮內(nèi)PGF2α含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。各藥物組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　PGE2：與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)PGE2含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（藥物2：1組：P<0.05,而模型組、藥物1

10、：1組、藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組：P<0.01）。與模型組比較，藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組小鼠子宮內(nèi)PGE2含量增加，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與益母草膏組比較，藥物2：1組小鼠子宮內(nèi)PGE2含量升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。各藥物組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　OT：與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)OT表達(dá)增加，差異有統(tǒng)計學(xué)

11、意義（藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組：P<0.05，而藥物3：2組、模型組、益母草膏組：P<0.01）。與模型組比較，各給藥組小鼠子宮內(nèi)OT表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（益母草膏組為P<0.05，而藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組均為P<0.01）。各治療組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均為P>0.05)。
　　E2：與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)E2含量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（藥物3：1組、藥

12、物3：2組、模型組：P<0.01，而藥物1：1組、藥物2：1組、益母草膏組：P<0.05）。與模型組比較，各給藥組小鼠子宮內(nèi)E2含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（藥物3：1組、藥物3：2組：P<0.05，而藥物1：1組、藥物2：1組、益母草膏組：P<0.01）。各治療組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　P：與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)P含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（藥物1：1組、藥物2：1組：P<0.05，而藥物

13、3：1組、藥物3：2組、益母草膏組、模型組：P<0.01）。與模型組比較，各給藥組小鼠子宮組織內(nèi)P含量增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（藥物1：1組、藥物2：1組：P<0.01，而藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組：P<0.05）。各治療組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　AVP：與空白對照組比較，模型組及各給藥組小鼠子宮內(nèi)AVP含量有所增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（藥物2：1組：P<0.05，而模型組、藥物1：1組、藥物3：1組

14、、藥物3：2組、益母草膏組均為：P<0.01）。與模型組比較，藥物1：1組、藥物2：1組、藥物3：1組、藥物3：2組、益母草膏組小鼠AVP含量降低，差異有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與益母草膏組比較，藥物2：1組小鼠子宮AVP水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。各藥物組之間差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、行為學(xué)方面證實了原發(fā)性痛經(jīng)模型的建立成功，可用于臨床疾病的研究。
　　2、

15、PGF2α、OT、E2、AVP、OTR蛋白、OTR mRNA在原發(fā)性痛經(jīng)模型的子宮組織中表達(dá)升高，而PGE2、P表達(dá)降低。提示 PGF2α、PGE2、OT、E2、P、AVP、OTR蛋白、OTR mRNA均參與原發(fā)性痛經(jīng)疼痛的發(fā)生。
　　3、當(dāng)歸-川芎藥對具有鎮(zhèn)痛作用，同時還可以降低痛經(jīng)模型子宮組織中升高的PGF2α、OT、E2、AVP、OTR蛋白、OTR mRNA，升高痛經(jīng)模型子宮組織中降低的PGE2、P，提示該藥對可通過調(diào)節(jié)子宮