當(dāng)歸芍藥散治療痛經(jīng)活性部位的篩選及藥理學(xué)研究.pdf

1、當(dāng)歸芍藥散原方主治“婦人妊娠諸疾痛”以及“婦人雜病腹中諸疾痛”。在多年的中醫(yī)臨床實(shí)踐中，該方用于治療痛經(jīng)有良好療效，痛經(jīng)癥狀明顯減輕，且療效鞏固，但其發(fā)揮痛經(jīng)治療作用的活性組分或活性成分目前尚不清楚。本室前期研究發(fā)現(xiàn)DSS對(duì)醋酸致痛小鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，同時(shí)能明顯抑制離體子宮平滑肌收縮，在此基礎(chǔ)上，我們對(duì)DSS進(jìn)行分離提取，獲得了四個(gè)提取部位，即DSS-A-W-W、DSS-W、DSS-A-E和DSS-A-N-30，并采用離體子宮平滑肌

2、收縮實(shí)驗(yàn)和小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)對(duì)它們進(jìn)行了活性篩選，進(jìn)而在整體痛經(jīng)模型和離體子宮平滑肌模型上對(duì)篩選獲得活性部位治療痛經(jīng)的作用及其可能的作用機(jī)理進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。 一、當(dāng)歸芍藥散治療痛經(jīng)活性部位的篩選 1、醋酸扭體實(shí)驗(yàn)篩選當(dāng)歸芍藥散治療痛經(jīng)活性部位 在小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕嫌^察了DSS四個(gè)提取部位的鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果表明，DSS-A-W-W(414.0 mg/g)、DSS-W(1750.0 mg/kg)、DSS-A-E(23

3、0.0 mg/kg)和DSS-A-N-30(39.6 mg/kg)均可明顯減少醋酸致痛小鼠的扭體次數(shù)，與陽(yáng)性藥阿斯匹林(100.0 mg/kg)和DSS(9000.0 mg/kg)作用一致：結(jié)果提示，DSS四個(gè)提取部位DSS-A-W-W、DSS-W、DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)醋酸致痛小鼠均具有鎮(zhèn)痛作用。 2、離體子宮平滑肌實(shí)驗(yàn)篩選 當(dāng)歸芍藥散治療痛經(jīng)活性部位痛經(jīng)與子宮的功能狀態(tài)有關(guān)。本研究采用未孕動(dòng)情期大鼠離

4、體子宮平滑肌，觀察了DSS四個(gè)提取部位對(duì)其自發(fā)收縮的影響，結(jié)果表明，DSS(7140.0 mg/L)單次處理能明顯抑制大鼠離體子宮平滑肌自發(fā)性收縮；DSS-A-E(16.4、32.8、49.2和65.7 mg/L)和DSS-A-N-30(283.0 mg/L)單次處理即可顯著抑制大鼠離體子宮平滑肌自發(fā)性收縮；DSS-W(0～643.0 mg/L)累計(jì)加藥有抑制子宮平滑肌自發(fā)性收縮的趨勢(shì)但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而DSS-A-W-W(0～2957.

5、0mg/L)累積加藥處理對(duì)大鼠離體子宮平滑肌條的自發(fā)性收縮無(wú)明顯影響。結(jié)果提示，提取部位DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)大鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)性收縮具有直接抑制作用。 綜合整體醋酸扭體實(shí)驗(yàn)和離體平滑肌實(shí)驗(yàn)的篩選結(jié)果，DSS-A-E和DSS-A-N-30具有鎮(zhèn)痛作用的同時(shí)對(duì)離體子宮平滑肌的收縮亦具有抑制作用，提示它們可能是DSS治療痛經(jīng)的兩個(gè)活性部位。 二、當(dāng)歸芍藥散活性部位DSS-A-E和DSS-A-N-30的鎮(zhèn)

6、痛作用 1、與模型組比較，陽(yáng)性藥阿斯匹林(100.0 mg/kg)和DSS(9000.0 mg/kg)能明顯減少醋酸致痛小鼠的扭體次數(shù)，DSS-A-E(115.0、230.0和460.0 mg/kg)和DSS.A-N-30(19.8、39.6和79.2 mg/kg)也能明顯減少模型小鼠的扭體次數(shù)，表明DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)醋酸致痛模型小鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。 2、為提高子宮對(duì)催產(chǎn)素的敏感性，造模前3天小鼠

7、皮下注射己烯雌酚(0.2 mg/只，1次/d，連續(xù)3天)，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天以20 IU/kg催產(chǎn)素給予小鼠腹腔注射，小鼠因子宮痙攣疼痛而出現(xiàn)扭體反應(yīng)，在30 min以內(nèi)扭體次數(shù)較多，提示成功建立了小鼠痛經(jīng)模型。DSS(9000.0 mg/kg)可明顯減少模型小鼠的扭體次數(shù)。DSS-A-E(115.0、230.0和460.0 mg/kg)也具有減少小鼠扭體次數(shù)的作用，其中，230.0和460.0 mg/kg劑量組的作用最為明顯。DSS-A-N-3

8、0(19.8、39.6和79.2 mg/kg)的作用與DSS和DSS-A-E類似，以低劑量(19.8 mg/kg)作用最為明顯。上述結(jié)果表明DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)催產(chǎn)素致痛經(jīng)小鼠的疼痛具有明顯改善作用。 三、當(dāng)歸芍藥散活性部位DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響 1、溶劑對(duì)照組子宮平滑肌條在處理后30 min內(nèi)自發(fā)性收縮無(wú)明顯變化。濃度為7140.0 mg/L的DSS對(duì)子宮平

9、滑肌條自發(fā)性收縮具有抑制作用，這種作用在處理10 min后基本達(dá)到最強(qiáng)，在20 min僅略有增強(qiáng)，并至少維持到30 min。DSS-A-E(16.4、32.8、49.2和65.7 mg/L)在處理10 min后即表現(xiàn)出明顯的抑制作用，該作用隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，在20 min后達(dá)到最大藥效，并至少維持到30：min：同時(shí)這種抑制作用隨DSS-A-E濃度的增加而增強(qiáng)，中、高濃度(49.2、65.7 mgL)的抑制率約為60％。DSS-A-

10、N-30(141.5、283.0和566.0 mg/L)在處理10 min后抑制作用最強(qiáng)，其后抑制作用略有下降，抑制率最高可達(dá)40％左右(283.0、566.0mg/L)。結(jié)果表明DSS-A-E和DSS-A-N-30能明顯抑制大鼠子宮平滑肌條的自發(fā)性收縮。 2、結(jié)果表明DSS-A-E和DSS-A-N-30能明顯抑制催產(chǎn)素引起的大鼠離體子宮平滑肌條劇烈收縮；DSS-A-E和DSS-A-N-30可以顯著抑制PGF<,2a>引起的大鼠

11、離體子宮平滑肌條劇烈收縮；DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)ACh引起大鼠子宮平滑肌條的劇烈收縮具有顯著抑制作用；DSS-A-E能明顯緩解KCI致離體子宮平滑肌條強(qiáng)直收縮，而DSS-A-N-30無(wú)明顯作用，提示DSS-A-E可以顯著抑制胞外鈣離子內(nèi)流而．DSS-A-N-30則無(wú)明顯作用。 3、總結(jié)離體平滑肌收縮實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可見(jiàn)，DSS-A-E和DSS-A-N-30均可以抑制大鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)性收縮及由子宮收縮促進(jìn)劑(催產(chǎn)

12、素、PGF<,2a>和ACh)引起的離體子宮平滑肌劇烈收縮，提示DSS-A-E和DSS-A-N-30可能對(duì)正常及痛經(jīng)情況下子宮平滑肌的收縮具有抑制作用；DSS-A-E可顯著抑制KC1引起的離體子宮平滑肌強(qiáng)直收縮，DSS-A-E和DSS-A-N-30均可抑制催產(chǎn)素在無(wú)鈣平衡鹽溶液中引起的離體子宮平滑肌持續(xù)收縮，提示DSS-A-E能通過(guò)抑制細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放兩種途徑降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度而抑制子宮平滑肌收縮，而DSS-A-N-3

13、0主要通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度來(lái)抑制子宮平滑肌收縮。 四、當(dāng)歸芍藥散活性部位DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)小鼠生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用 本研究口服給予正常成年ICR小鼠藥物12天，觀察DSS-A-E和DSS-A-N-30對(duì)小鼠生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。 1、DSS-A-E(115.0、230.0和460.0 mg/kg)和DSS-A-N-30(19.8、39.6和79.2 mg/kg)與

14、DSS(9000.0 mg/kg)作用相似，對(duì)正常雌性小鼠動(dòng)情期和動(dòng)情間期的持續(xù)時(shí)間以及子宮和卵巢重量均無(wú)明顯影響。 2、DSS-A-E和DSS-A-N-30能降低小鼠血清E<,2>水平，且以降低動(dòng)情期血清E<,2>水平為主。 3、DSS-A-E和DSS-A-N-30能下調(diào)小鼠垂體LH蛋白表達(dá)。 4、DSS-A-E和DSS-A-N-30可以降低子宮組織PGF<,2a>水平。 通過(guò)以上研究主要得出以下結(jié)論：

15、 1．DSS-A-E和DSS-A-N-30能明顯減少醋酸致痛小鼠和催產(chǎn)素致痛經(jīng)模型小鼠的扭體次數(shù)，提示DSS-A-E和DSS-A-N-30可能具有治療痛經(jīng)的作用。 2．DSS-A-E和DSS-A-N-30可以抑制大鼠離體子宮平滑肌的自發(fā)性收縮及由子宮收縮促進(jìn)劑(催產(chǎn)素、PGF<,2a>、和ACh)引起的離體子宮平滑肌劇烈收縮，提示DSS-A-E和DSS-A-N-30可能對(duì)正常及痛經(jīng)情況下子宮平滑肌的收縮均具有抑制作用。

16、 3．DSS-A-E可以顯著抑制KCI引起的離體子宮平滑肌強(qiáng)直收縮，而DSS-A-N-30則作用不明顯；DSS-A-E和DSS-A-N-30均可抑制催產(chǎn)素在無(wú)鈣平衡鹽溶液中引起的離體子宮平滑肌持續(xù)收縮，其中DSS-A-E作用緩慢而持久，DSS-A-N-30作用迅速但隨時(shí)間延長(zhǎng)作用有所減弱，提示DSS-A-E能通過(guò)抑制細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流和細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放兩種途徑降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度來(lái)抑制子宮平滑肌收縮，而DSS-A-N-30主要通過(guò)抑制

17、細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放來(lái)降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，從而抑制子宮平滑肌收縮。 4．DSS-A-E和DSS-A-N-30口服給藥能明顯降低正常小鼠動(dòng)情期血清E<,2>水平，下調(diào)垂體LH表達(dá)，提示DSS-A-E和DSS-A-N-30有調(diào)節(jié)生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)的作用。 5．DSS-A-N-30可以顯著降低子宮組織PGF<,2a>水平，提示降低子宮組織PGF<,2a>水平可能是DSS-A-N-30治療痛經(jīng)的作用機(jī)制之一。 6．DSS-A-E