青蒿體外止血活性部位篩選及其應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　 青蒿素是從植物青蒿中提取的抗瘧疾藥，具有高效、速效、低毒的特點(diǎn)，是我國(guó)唯一被世界衛(wèi)生組織認(rèn)可的按西藥研究標(biāo)準(zhǔn)研究開(kāi)發(fā)的植物藥。我國(guó)是世界上青蒿素原料藥最大的生產(chǎn)國(guó)，其產(chǎn)量占全球九成。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)青蒿的研究主要集中于青蒿素及其衍生物上，而對(duì)青蒿其他活性成分的研究及報(bào)道很少。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道青蒿具有多種藥理活性，本課題在保障青蒿素提取質(zhì)量的基礎(chǔ)上，結(jié)合傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的記載，對(duì)青蒿中其它成分進(jìn)行探討，以達(dá)到對(duì)青蒿資源最大限度的利用。

2、
　　 本課題通過(guò)體外促凝血實(shí)驗(yàn)，初步篩選出青蒿止血活性部位，為青蒿作為止血藥的臨床應(yīng)用提供客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。同時(shí)，精油也是青蒿中除青蒿素之外的一大類(lèi)物質(zhì)，文獻(xiàn)報(bào)道其具有顯著的抗菌作用。基于以上兩點(diǎn)，本課題組提出一種新劑型的設(shè)計(jì)：以篩選出的止血活性部位和青蒿精油作為主要的物質(zhì)基礎(chǔ)，使其在止血的同時(shí)兼具抗菌效果。本課題對(duì)青蒿資源的深度研究具有一定的的學(xué)術(shù)價(jià)值及潛在的應(yīng)用前景。
　　 方法：
　　 1.青蒿體外凝血評(píng)價(jià)

3、方法的篩選：①青蒿經(jīng)75％乙醇浸提，得粗提物。粗提物經(jīng)石油醚、乙酸乙酯、正丁醇按順序依次萃取，得各種有機(jī)溶劑萃取物。以凝血板法、試管法、血漿復(fù)鈣時(shí)間測(cè)定法進(jìn)行體外凝血實(shí)驗(yàn)的比較研究。②篩選出比較理想的評(píng)價(jià)方法，并用實(shí)驗(yàn)室可用止血中草藥對(duì)此方法進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 2.青蒿止血活性部位的確定：①青蒿粗提物及四部分萃取物通過(guò)凝血板法，試管法及血漿復(fù)鈣時(shí)間進(jìn)行測(cè)定。對(duì)青蒿正丁醇部分通過(guò)聚酰胺，MCI，凝膠柱等進(jìn)行分離純化。②以血漿復(fù)鈣時(shí)間

4、作為檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)正丁醇萃取部分過(guò)聚酰胺柱后水洗脫部分再上MCI柱，經(jīng)20％甲醇洗脫部分(記為α)進(jìn)行多次重復(fù)體外凝血實(shí)驗(yàn)比較研究。③有效部位的成分分析：采用化學(xué)定性鑒別法，主要對(duì)鞣質(zhì)類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿、有機(jī)酸、氨基酸、揮發(fā)油、蛋白質(zhì)、糖類(lèi)、葸醌類(lèi)、皂甙類(lèi)等幾大類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行初步鑒定。
　　 3.擬開(kāi)發(fā)的新型抗菌止血?jiǎng)┬脱芯浚菏紫?，將α部分與精油按一定比例混合測(cè)定其抗菌與止血活性；其次，通過(guò)對(duì)新型的抗菌止血?jiǎng)┬瓦M(jìn)行設(shè)計(jì)，得出比較合理的

5、作用模型。
　　 結(jié)果：
　　 1.中草藥凝血評(píng)價(jià)模型的篩選：通過(guò)對(duì)青蒿乙醇粗提物以及四部分有機(jī)溶劑萃取物(石油醚部分，乙酸乙酯部分，正丁醇部分，水部分)進(jìn)行三種體外凝血實(shí)驗(yàn)方法的比較研究，得出青蒿粗提物具有體外凝血效果，且其正丁醇部分凝血時(shí)間縮短率最高。血漿復(fù)鈣時(shí)間同凝血時(shí)間測(cè)定法相比較，具有對(duì)凝血時(shí)間敏感，血漿凝固較快的特點(diǎn)，實(shí)驗(yàn)在一定的溫度下進(jìn)行，是連續(xù)地而非間歇地進(jìn)行觀察的，實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)比較清楚，結(jié)果可復(fù)制。

6、　　 2.青蒿止血活性部位的確定：①多次重復(fù)體外凝血實(shí)驗(yàn)的比較研究，均證明青蒿正丁醇萃取部分及α部分具有良好的體外促凝作用。②活性部位篩選過(guò)程中，凝血時(shí)間縮短率依次為：青蒿粗(8.51％)，青蒿正丁醇部分(14.89％)，正丁醇部分過(guò)聚酰胺柱經(jīng)水沈脫部分(記為青正水：22.11％)，α部分(27.37％)，Sc，Sd及剩余部分凝血時(shí)間縮短率明顯低于青蒿粗提物甚至出現(xiàn)不凝現(xiàn)象。α部分的凝血時(shí)間縮短率明顯大于萃取前的青蒿粗體物，同時(shí)也大于

7、其后的提取部分。因此，可說(shuō)明α部分為青蒿止血的有效部位。③定性鑒別結(jié)果表明：初步確定有效部位的主要成分為鞣質(zhì)類(lèi)，生物堿，有機(jī)酸，糖，蒽醌等幾大類(lèi)。
　　 3.新型抗菌止血貼劑研究：①將α部分與精油按1∶1混合，測(cè)定其抗菌與止血活性。結(jié)果表明二者結(jié)合后各自的效果沒(méi)有減弱，相反有一定程度的增強(qiáng)。②優(yōu)化出擬開(kāi)發(fā)的新型抗菌止血模型，得出了理論上較好四層貼劑模型。由被襯層，含α部分壓敏膠層，精油層及防粘層組成。
　　 結(jié)論：

8、>　　 青蒿乙醇粗提物經(jīng)一系列的萃取，過(guò)聚酰胺柱，MCI凝膠柱，薄層色譜等分離純化手段進(jìn)行篩選，最終確定α部分為青蒿止血活性部位；通過(guò)精油與α部分混合的初步實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證將兩者共同作為物質(zhì)基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)出具有抗菌止血性能的劑型具有理論可行性。同時(shí)，四層貼劑模型的設(shè)計(jì)為此新型抗菌止血貼劑的開(kāi)發(fā)提供了明確的方向。由于青蒿素主要存在于青蒿提取物的石油醚萃取部分，而本課題所用的精油可以從提取青蒿素的預(yù)處理中獲得，α部分可以在提取青蒿素后的殘?jiān)蟹蛛x到。