誘導多能性干細胞的建系及其體外向內皮細胞和造血祖細胞定向分化的實驗研究.pdf

1、高效制備誘導多能性干細胞(iPS細胞)，并研究其向內皮細胞和造血祖細胞的定向分化能力，對組織工程中種子細胞的研究具有重要意義。本研究目的是探討以磁性納米粒子為基因載體的技術，高效制備iPs細胞并建系。進一步進行體外iPS細胞定向誘導分化為內皮細胞和造血祖細胞的實驗研究。
　　 實驗方法如下：
　　 1.以第5代PAMAM樹形分子修飾磁性納米粒子作為基因轉染載體，將4種轉錄因子Oct4、Sox2、Nanog、Lin28，連

2、同包裝質粒psPAX2和包膜蛋白質粒PMD2.G，共同傳染293T細胞，將所獲得的含有4種基因的慢病毒和人成纖維細胞在37℃下共同孵育，直至產生胚胎干細胞(ES細胞)樣細胞克隆。同樣的方法，以脂質體為基因載體，作為對照組，比較兩種載體在轉載后生成的慢病毒滴度。
　　 2.ES樣細胞克隆通過形態(tài)學、免疫熒光染色法、核型分析、類胚體及畸胎瘤形成等鑒定，證明iPS細胞的成功建系。
　　 3.改良傳統(tǒng)ES細胞與OP9細胞共培養(yǎng)的

3、誘導方式，運用OP9細胞產生的條件培養(yǎng)液，進行EB細胞懸浮法培養(yǎng)，在FLK1大量表達時，進行體外向內皮細胞和造血祖細胞的定向分化。
　　 結果顯示，樹形分子修飾的磁性納米粒子能夠將全部4種基因轉載進入293T。細胞，所獲得的慢病毒轉導入人成纖維細胞，生成iPS細胞。其生成的慢病毒的滴度，為對照組脂質體轉載生成慢病毒的10倍。免疫熒光、核型分析以及類胚體與畸胎瘤形成，顯示iPS細胞具備多向分化潛能。并運用自創(chuàng)的OP9細胞條件培養(yǎng)液