小鼠ES細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化與建系實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、近年來,胚胎干細(xì)胞(ES cells)以其具有全能性、可操作性和可塑性等諸多優(yōu)點(diǎn),已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一.研究者們?cè)噲D用ES細(xì)胞建立糖尿病、老年型癡呆、帕金森氏癥等遺傳疾病轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型.在這些研究中,最關(guān)鍵的是ES細(xì)胞的來源和定向誘導(dǎo)分化問題.進(jìn)行一系列研究必須要有足夠的ES細(xì)胞,特別是建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型,需要10代以內(nèi)的ES細(xì)胞;而用作細(xì)胞治療研究也必須解決其他分化細(xì)胞的影響問題.在我們的實(shí)驗(yàn)中,以小鼠ES-D3細(xì)

2、胞系為對(duì)象,通過細(xì)胞培養(yǎng)大量增殖未分化細(xì)胞,再用兩種方法進(jìn)行ES細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn).首先從胚體(EBs)本身探討ES細(xì)胞內(nèi)部調(diào)控誘導(dǎo)分化的機(jī)制,用懸浮培養(yǎng)、懸滴培養(yǎng)、懸浮轉(zhuǎn)懸滴培養(yǎng)的方法培養(yǎng)出不同時(shí)間的EBs,再加以RA處理,觀察比較EBs對(duì)ES細(xì)胞神經(jīng)分化的影響;在此基礎(chǔ)上,用不同濃度的RA處理EBs,分析誘導(dǎo)劑RA對(duì)ES細(xì)胞神經(jīng)分化的影響.結(jié)果表明,用10<'-6>M的RA處理懸滴培養(yǎng)3d轉(zhuǎn)懸浮培養(yǎng)1d的EBs 4d,能得

3、到較高的神經(jīng)分化比例.同時(shí),為以后開展轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的研究,我們還進(jìn)行了小鼠ES細(xì)胞建系的部分工作.以ICR小鼠和昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用超數(shù)排卵的方法獲得小鼠胚胎,培養(yǎng)在用絲裂霉素C處理過的ICR小鼠和昆明小鼠MEF細(xì)胞飼養(yǎng)層上,選取適當(dāng)時(shí)間離散增殖的ICM和類ES細(xì)胞集落,分析了在小鼠ES細(xì)胞建系過程中,飼養(yǎng)層細(xì)胞、消化液及不同品系來源的胚胎的影響.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,ICR小鼠和昆明小鼠兩種來源的飼養(yǎng)層細(xì)胞對(duì)胚胎貼壁、ICM增殖無影響