可溶性CD40配體對(duì)上皮性卵巢癌的體外作用機(jī)制及耐藥敏感性影響的研究.pdf

1、目的：卵巢癌為婦科惡性腫瘤的首要死亡原因之一，5年生存率仍徘徊在30％左右。近幾年，細(xì)胞因子基因治療已成為一種新型的腫瘤治療方法，并越來(lái)越受到人們的重視。CD40是存在于免疫細(xì)胞及多種腫瘤細(xì)胞上的腫瘤壞死因子受體超家族成員，已有研究證明用CD40配體可直接誘導(dǎo)CD40陽(yáng)性的人結(jié)腸癌、乳腺癌和肺癌細(xì)胞的凋亡。本研究旨在探討人的可溶性CD40配體(soluble CD40 ligand，sCD40L)對(duì)人上皮性卵巢癌細(xì)胞株SKOV3及其對(duì)順

2、鉑耐藥的卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/DDP增殖的影響及可能作用機(jī)制，為sCD40L應(yīng)用于卵巢癌和對(duì)DDP耐藥的卵巢癌的治療之可行性提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)的方法檢測(cè)SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中CD40基因的表達(dá)情況。
　　 2、Cell Titer96 AQueous，非放射性細(xì)胞增殖檢測(cè)法(MTS)檢測(cè)不同濃度sCD40L在不同時(shí)間對(duì)SKOV3、SKOV3

3、/DDP細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)檢測(cè)不同濃度的順鉑在相同時(shí)間內(nèi)對(duì)兩種細(xì)胞增殖的影響。
　　 3、MTS法檢測(cè)sCD40L聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3、SKOV3/DDP細(xì)胞抑制增殖的影響。
　　 4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)sCD40L及sCD40L聯(lián)合順鉑處理SKOV3細(xì)胞前后細(xì)胞周期的改變。
　　 5、RT-PCR的方法檢測(cè)sCD40L及sCD40L聯(lián)合順鉑處理SKOV3細(xì)胞前后survivin，caspase-3及caspase

4、-9基因的表達(dá)情況。
　　 6、RT-PCR的方法檢測(cè)sCD40L及sCD40L聯(lián)合順鉑處理SKOV3/DDP細(xì)胞前后MDR1，LRP，GST-π及survivin基因的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中均有CD40的表達(dá)，SKOV3的表達(dá)水平為0.281±0.007，SKOV3/DDP的表達(dá)水平為0.427±0.012。
　　 2、不同濃度的sCD40L對(duì)兩種細(xì)胞的

5、抑制作用隨濃度的增加而增強(qiáng)，呈明顯的劑量依賴性，不同濃度間比較差異具有顯著性(P<0.05)；同一濃度作用于兩種細(xì)胞，抑制作用的差異無(wú)顯著性(P>0.05)。sCD40L對(duì)于SKOV3細(xì)胞48h的IC50為3.47μg/ml，對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞的IC50為3.22μg/ml。
　　 3、順鉑對(duì)SKOV3/DDP細(xì)胞的IC50為25.12μg/ml，是對(duì)SKOV3細(xì)胞的(IC50為5.52μg/ml)4.55倍，即SKOV3

6、/DDP細(xì)胞耐藥倍數(shù)為4.55。
　　 4、sCD40L聯(lián)合順鉑作用于SKOV3細(xì)胞，使順鉑IC50由單用時(shí)的5.52μg/ml，分別下降到2.61μg/ml和1.46μg/ml。對(duì)sCD40Llμg/ml聯(lián)合順鉑作用于SKOV3/DDP細(xì)胞后，使順鉑的IC50由單一用藥時(shí)的25.12μg/ml下降為9.25μg/ml，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)2.71；sCD40L2μg/ml聯(lián)合順鉑使順鉑的IC50下降為4.83μg/ml，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)5.20。

7、
　　 5、sCD40L和順鉑作用SKOV3/DDP細(xì)胞48h后，sCD40L組和順鉑聯(lián)合sCD40L組出現(xiàn)G0/G1期比例上升，S期比例下降，藥物濃度越高，該作用越明顯，sCD40L與順鉑聯(lián)合作用比單獨(dú)用sCD40L時(shí)更明顯(P<0.05)。
　　 6、SKOV3細(xì)胞經(jīng)sCD40L和順鉑作用48h后，各組的survivin mRNA的表達(dá)水平逐漸降低，caspase-3 mRNA及caspase-9 mRNA的表達(dá)水平

8、逐漸增高，與陰性對(duì)照組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 7、SKOV3/DDP細(xì)胞經(jīng)sCD40L和順鉑作用48h后，各組的MDR1 mRNA、LRP mRNA、GST-πmRNA及survivin mRNA的表達(dá)水平逐漸降低，與陰性對(duì)照組相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、SKOV3、SKOV3/DDP細(xì)胞中均有CD40的表達(dá)。
　　 2、sCD40L可抑制

9、SKOV3細(xì)胞的增殖，sCD40L和順鉑聯(lián)合應(yīng)用可加強(qiáng)順鉑對(duì)細(xì)胞的抑制作用。sCD40L可能使細(xì)胞阻滯于G0/G1期而使細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制，sCD40L可能通過下調(diào)survivin基因，上調(diào)caspase-3，caspase-9基因而誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡。
　　 3、sCD40L可抑制SKOV3/DDP細(xì)胞的增殖，并在一定程度上可逆轉(zhuǎn)SKOV3/DDP細(xì)胞的耐藥。sCD40L可能通過下調(diào)MDR1、LRP、GST-π、survi