HSP90抑制劑Geldanamycin改善卵巢癌耐藥細(xì)胞對(duì)Taxol敏感性研究.pdf

1、熱休克蛋白90(HSP90)在生物進(jìn)化過(guò)程中高度保守，作為經(jīng)典的分子伴侶，對(duì)許多參與細(xì)胞內(nèi)正常生理活動(dòng)信號(hào)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能都有調(diào)控作用。大多數(shù)腫瘤細(xì)胞內(nèi)HSP90蛋白表達(dá)水平升高，因此，抑制HSP90的功能，使其不能與客戶(hù)蛋白正常結(jié)合從而降解其底物，阻斷細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)，可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。紫杉醇類(lèi)藥物是卵巢癌臨床化療的一線藥物，化療耐藥嚴(yán)重影響卵巢癌病人預(yù)后。
　　目的:
　　本研究旨在探索HSP90抑制劑Geldanam

2、ycin(GA)單獨(dú)使用時(shí)以及與Taxol聯(lián)用時(shí)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，通過(guò)進(jìn)一步探索兩藥聯(lián)用在卵巢癌耐Taxol細(xì)胞株中的協(xié)同作用機(jī)制，為改善卵巢癌紫杉醇化療耐藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1、CCK8實(shí)驗(yàn)、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)單獨(dú)使用GA以及與Taxol聯(lián)用對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖的影響。2、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)單獨(dú)使用GA以及與Taxol聯(lián)用對(duì)細(xì)胞周期和凋亡的影響。3、Western blotting方法探索GA與Taxol

3、聯(lián)用效應(yīng)的相關(guān)分子機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1、隨著Taxol濃度的增加，卵巢癌細(xì)胞A2780和A2780/T細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)不斷增強(qiáng)。當(dāng)藥物濃度增加到200 nM及以上時(shí)，Taxol在兩株細(xì)胞中引起的增殖抑制效應(yīng)不再隨著濃度增加而增強(qiáng)。當(dāng)Taxol濃度為10nM和20nM時(shí)，與A2780/T細(xì)胞相比，A2780細(xì)胞增殖抑制作用更明顯。2、隨著GA濃度的增加，卵巢癌細(xì)胞A2780和A2780/T細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)逐漸增強(qiáng)，且

4、A2780/T較A2780更敏感。當(dāng)GA濃度為10nM時(shí)，兩株細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)尚不明顯，當(dāng)藥物濃度為100nM時(shí)，兩株細(xì)胞的增殖抑制效應(yīng)均明顯增強(qiáng)。當(dāng)藥物濃度增加到500 nM及以上時(shí)，GA在兩株細(xì)胞中引起的增殖抑制效應(yīng)不再隨著濃度增加而增強(qiáng)。3、100nM GA與Taxol聯(lián)用時(shí)，在細(xì)胞內(nèi)引起凋亡效應(yīng)較單獨(dú)使用GA或者Taxol增強(qiáng)，在一定濃度范圍內(nèi)，隨著Taxol濃度的增加，聯(lián)用后產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用呈協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，聯(lián)

5、用組和單獨(dú)使用GA或者Taxol組之間有顯著性差異。4、Western blot結(jié)果顯示，GA與Taxol聯(lián)用時(shí)，A2780/T細(xì)胞內(nèi)剪切型PARP及Caspase3表達(dá)顯著性增強(qiáng)，H3P、pho-P38和pho-H2AX表達(dá)明顯增加，而pho-CDK1(pho-Y15)表達(dá)明顯下降。
　　結(jié)論:
　　HSP90小分子抑制劑GA可以有效抑制卵巢癌細(xì)胞的增殖，低劑量GA(100 nM)可顯著增強(qiáng)紫杉醇在卵巢癌耐藥細(xì)胞株A278