白介素13與白喉毒素融合蛋白靶向治療活性相關(guān)的研究.pdf

1、白喉毒素是白喉桿菌產(chǎn)生的細(xì)菌外毒素，1-2個分子就可以殺滅一個細(xì)胞。IL-13是一種由活化T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，受體有IL-13Rα1和IL-13Rα2，IL-13Rα2單體形式對IL-13有高親和力，被認(rèn)為是腫瘤特異且高親和的靶點。 本實驗通過誘導(dǎo)已構(gòu)建的質(zhì)粒大腸桿菌，表達(dá)并獲得IL-13與白喉毒素融合蛋白DT389-hIL13-13E13K。分別通過稀釋復(fù)性和柱上復(fù)性兩種方法提純后，通過體內(nèi)外實驗研究了該融合蛋白對腦膠質(zhì)瘤的

2、靶向殺傷活性。在體外實驗中，選取了融合蛋白的7個濃度組(10-7M、5×10-8M、10-8M、5×10-9M、10-9M、5×10-10M、10-10M、10-11M中的七個)、三個時間點(24、48、72小時)檢測融合蛋白DT389-hIL，13-13E13K對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷活性。在體內(nèi)實驗中，將腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87注于小鼠背部皮下建立腫瘤模型，選取30μg/kg、100μg/kg、300μg/kg、1000μg/kg四種給藥濃

3、度，通過瘤內(nèi)注射的方法，每隔一天注射一次，共連續(xù)注射5次，觀察融合蛋白DT389-hIL13-13E13K的體內(nèi)腫瘤殺傷活性。同時，本實驗用RNA干擾的方法，初步探討了IL-13Rα2在融合蛋白DT389-hIL13-13E13K腫瘤治療中的作用。結(jié)果顯示，所得融合蛋白濃度純度達(dá)到95％以上。在體外活性實驗中，稀釋復(fù)性和柱上復(fù)性兩種純化方法獲得的融合蛋白DT389-hIL13-13E13K對腦膠質(zhì)瘤均有很好的殺傷效果，半數(shù)致死濃度分別達(dá)

4、到6×10-10M和1×10-8M，其中稀釋復(fù)性的方法純化的融合蛋白殺傷效果達(dá)到了國際水平。體內(nèi)活性測定結(jié)果顯示，融合蛋白DT389-hIL13-13E13K對腦膠質(zhì)瘤有一定的抑制作用，但效果并未達(dá)到使腫瘤完全消退的水平。同時，實驗結(jié)果表明，IL-13Rα2被干擾的腫瘤細(xì)胞系對融合蛋白DT389-hIL13-13E13K的敏感性下降，這說明該融合蛋白是通過IL-13Rα2介導(dǎo)抑制腫瘤細(xì)胞的生長。另外，實驗也發(fā)現(xiàn)了一些國內(nèi)外尚未報道的高表