（魚安）（魚康）魚皮硫酸皮膚素的提取、純化、結(jié)構(gòu)和活性研究.pdf

1、本文旨在建立從鮟鱇魚皮中提取、純化硫酸皮膚素(DS)的方法,并對(duì)其結(jié)構(gòu)和抗凝血活性進(jìn)行研究。為鮟鱇魚皮的利用與硫酸皮膚素的開發(fā)提供理論依據(jù)。 鮟鱇魚皮硫酸皮膚素的提取采用酶解法,通過正交試驗(yàn)法和響應(yīng)面分析法對(duì)提取參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳提取工藝如下：鮟鱇魚皮原料加入2.5％的復(fù)合酶(木瓜蛋白酶：胰酶=1:2,W/W),按液料比26:1(V/W)加入蒸餾水,76℃下提取19小時(shí),3倍體積乙醇沉淀,冷凍干燥后得到粗品。 采用三

2、氯乙酸(TCA)法、Sevag法和CPC法對(duì)提取所得DS進(jìn)行純化,結(jié)果顯示Sevag法和CPC法純化效果均較好,三氯乙酸法純化效果較差。Sevag法操作簡便,比CPC法更具優(yōu)越性。經(jīng)液相色譜法和醋酸纖維薄膜電泳法雙重鑒定表明純化后的DS為單一組分,純度為99.15％。 通過化學(xué)法對(duì)鮟鱇魚皮DS的基本組成進(jìn)行分析,結(jié)果表明DS中氨基己糖含量為35.75±1.70％,己糖醛酸含量為29.02±2.90％,硫酸基含量為18.83±0.

3、60％,硫酸基與羧酸基的比值為1.02±0.14:1。與來源于豬皮、雞皮和牛蛙皮的DS相比,鮟鱇魚皮DS中硫酸基含量最高且它在組成上有別于其它來源的DS。根據(jù)高效凝膠滲透色譜(HPGPC)、氣相色譜(GC)、毛細(xì)管液相色譜(CLC)、質(zhì)譜(MS)、紅外光譜(IR)的分析結(jié)果,結(jié)合其他理化性質(zhì),對(duì)鮟鱇魚皮DS的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步確認(rèn)。鮟鱇魚皮DS的分子量為1.59×109,其結(jié)構(gòu)中存在木糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、艾杜糖醛酸和N-乙酰氨基半乳

4、糖五種單糖,摩爾比為0.07:0.04:0.07：1.12:1.19,其中木糖與半乳糖是存在于糖鏈與核心蛋白連接區(qū)的少量單糖。鮟鱇魚皮DS可被硫酸軟骨素ABC酶酶解,37℃反應(yīng)4小時(shí)可完全酶解,其糖鏈?zhǔn)且园盘侨┧?[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖-4硫酸(△Di-4S(Ido))為主要二糖重復(fù)單位構(gòu)成的,此外還含有少量的艾杜糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳糖-6硫酸(△Di-6S(Ido))和葡萄糖醛酸-[1→3]-N-乙酰氨基半乳

5、糖(△Di-OS)二糖單位?！鱀i-OS、△Di-4S(Ido)與△Di-6S(Ido)三種不飽和二糖的摩爾比為0.01:1.71:0.01。鮟鱇魚皮DS具有糖胺聚糖的特征紅外吸收,其單糖環(huán)型為吡喃型。 鮟鱇魚皮DS的體外抗凝血活性實(shí)驗(yàn)以肝素為對(duì)照,研究了不同劑量DS對(duì)凝血時(shí)間(CT)和血漿凝血酶原時(shí)間(PT)的影響。結(jié)果表明,DS對(duì)凝血時(shí)間(CT)的影響較大,對(duì)血漿凝血酶原時(shí)間(PT)無顯著性影響,說明其凝血機(jī)制主要是作用于內(nèi)