鮟鱇魚糖胺聚糖的提取、分離和結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、本文以鮟鱇魚骨為原料進行了鮟鱇魚糖胺聚糖的提取、分離研究，并對分離得到的鮟鱇魚糖胺聚糖主要組分GAG Ⅰ進行了理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)分析。 通過對鹽離子強度、鹽解條件和醇沉條件的選擇，得到了稀堿-濃鹽法提取糖胺聚糖的最佳提取條件。最佳提取條件：以鮟鱇魚骨為原料，用20％NaCl溶液提取，提取液在pH7.8條件下升溫鹽解除蛋白，隨后pH2.5離心除蛋白，最終用70％體積分?jǐn)?shù)的乙醇將糖胺聚糖沉淀析出。 用稀堿-濃鹽法分別從鮟鱇魚頭骨

2、和椎骨中提取得到了的糖胺聚糖產(chǎn)品為白色粉末狀物質(zhì)，其得率分別為3.47％、1.24％，氨基己糖含量分別為28-31％、29.60％。紅外光譜和電泳分析結(jié)果表明鮟鱇魚頭骨提取物和椎骨提取物均為糖胺聚糖且均含兩種組分。 分別采用乙酸鈣-乙醇沉淀法和氯代十六烷基吡啶法對鮟鱇魚頭骨提取的糖胺聚糖進行進一步分離，結(jié)果顯示兩種分離方法均能將鮟鱇魚糖胺聚糖分離為兩種組分。兩種分離方法比較，乙酸鈣-乙醇沉淀法簡便易操作，且上樣量大，更適合鮟鱇魚

3、糖胺聚糖的分離。 鮟鱇魚頭骨糖胺聚糖經(jīng)離心沉淀、透析純化和乙酸鈣-乙醇法分級分離，可得到兩種組分GAG1和GAG2，分別占總糖胺聚糖的7.56％和92.44％；GAG2又可進一步分為三個級分GAG Ⅰ、GAG Ⅱ和GAGⅢ，其中GAG Ⅰ是主要分級產(chǎn)物，占總頭骨糖胺聚糖的55.67％，GAG Ⅱ和GAGⅢ分別占30.23％、6.54％。對GAG Ⅰ的研究表明GAG Ⅰ為單一組分，純度為99.12％。GAG Ⅰ可以被硫酸軟骨素AB

4、C酶酶解，且在37℃，2小時可完全酶解。GAG Ⅰ的理化性質(zhì)如下：水分含量為8.88％，氮含量為2.86％，氨基己糖和己糖醛酸含量分別為30.12％、31.40％，硫酸基含量為12.69％，硫酸基羧酸基比值為0.97：1。 結(jié)構(gòu)研究表明GAG Ⅰ是一種硫酸軟骨素類物質(zhì)，分子量為4×10<'6>。GAG Ⅰ的單糖構(gòu)成含β-D-半乳糖、β-D-葡萄糖醛酸和β-D-N-乙酰氨基葡萄糖，摩爾比為0.09：1.19：1。葡萄糖醛酸和N-乙

5、酰氨基葡萄糖結(jié)合構(gòu)成糖鏈的二糖重復(fù)單位，半乳糖可能存在于糖鏈與核蛋白連接區(qū)域。GAG Ⅰ的糖鏈由摩爾比為2.01：1的6-硫酸軟骨素二糖(AGlcUA-[1→3]-GalNAc-6S)和4-硫酸軟骨素二糖(AGlcUA-[1→3]-GalNAc-4S)為主要二糖重復(fù)單位組成，其結(jié)構(gòu)中還含有少量未知二糖及半乳糖，這些共同構(gòu)成了GAG Ⅰ的雜合型糖鏈。其主要二糖重復(fù)單位6-硫酸軟骨素二糖和4-硫酸軟骨素二糖分別占糖鏈組成的57.86％和28