仿刺參Apostichopus japonicus糖胺聚糖的制備、結(jié)構(gòu)分析和活性研究.pdf

1、我國海洋幅員遼闊，生物資源儲(chǔ)量十分豐富，中國產(chǎn)仿刺參的養(yǎng)殖面積十分廣闊，每年的產(chǎn)量巨大，其中的活性物質(zhì)，尤其是糖胺聚糖的生物利用度仍然比較低，其提取、分離方法的建立，精細(xì)結(jié)構(gòu)的表征和活性研究，是解決這一問題的主要難點(diǎn)。研究表明，仿刺參糖胺聚糖具有顯著的抗凝血活性和免疫調(diào)節(jié)活性，其作用機(jī)制研究目前仍然較少，因此，研究仿刺參糖胺聚糖，篩選其潛在生物活性，能夠?yàn)殚_發(fā)新的海洋活性多糖藥物提供了一個(gè)新的方向，具有十分重要的意義和應(yīng)用前景。

2、　　因此，本文以具有極高營養(yǎng)價(jià)值和商業(yè)價(jià)值的中國黃、渤海產(chǎn)仿刺參為材料，對(duì)其活性物質(zhì)仿刺參糖胺聚糖的提制備、結(jié)構(gòu)分析和活性篩選進(jìn)行了研究。本文的內(nèi)容主要有以下幾個(gè)部分:
　　1)首次優(yōu)化建立了仿刺參糖胺聚糖的分離、純化方法，制備了分子量固定、純度高的糖胺聚糖。利用化學(xué)法、核磁共振、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)等方法對(duì)所制備的高純度仿刺參糖胺聚糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，結(jié)果表明，仿刺參糖胺聚糖是一個(gè)重復(fù)三糖結(jié)構(gòu)，具有類似硫酸軟骨素的主鏈結(jié)構(gòu)，以及

3、硫酸化的巖藻糖支鏈，具體結(jié)構(gòu)為-[4GlcAβ(Fuc2，4Sα1-3)1-3GalNAc4，6Sβ1]n-，是一類新穎結(jié)構(gòu)的海參糖胺聚糖。
　　2)首次優(yōu)化建立了銅離子誘導(dǎo)的H2O2自由基降解仿刺參糖胺聚糖的方法，實(shí)現(xiàn)了仿刺參糖胺聚糖的可控降解，所得到的產(chǎn)物分子量分布窄、純度高，所用的試劑價(jià)格低廉，實(shí)驗(yàn)成本較低，適合大規(guī)模的制備。結(jié)果表明，在降解過程中，1/Mw與反應(yīng)時(shí)間t具有良好的線性關(guān)系，其反應(yīng)方程為:1/Mn(t)=0.0

4、130t+0.8492，r2=0.9924;而且降解過程中，糖胺聚糖的主鏈結(jié)構(gòu)、支鏈結(jié)構(gòu)和硫酸基取代均沒有發(fā)生顯著的變化，多糖的活性基團(tuán)得到了很好的保留。
　　3)對(duì)仿刺參糖胺聚糖及其不同分子量、結(jié)構(gòu)的衍生產(chǎn)物的抗凝血活性進(jìn)行了研究。得到一種相比于低分子量肝素更為安全可靠的非哺乳動(dòng)物來源的低分子量糖胺聚糖抗凝血化合物，可以作為肝素的替代品發(fā)揮其藥理學(xué)作用。結(jié)果表明，仿刺參糖胺聚糖是通過內(nèi)源性途徑或降低纖維蛋白原酶活性發(fā)揮其抗凝血作

5、用，其低分子量產(chǎn)物DAHG-2是一種良好的肝素替代藥物。
　　4)首次對(duì)仿刺參糖胺聚糖在免疫調(diào)節(jié)方面的活性進(jìn)行了研究。測定了仿刺參糖胺聚糖對(duì)體外原代培養(yǎng)的小鼠樹突狀細(xì)胞和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞在增殖和細(xì)胞因子分泌的方面的作用，為開發(fā)新的免疫調(diào)節(jié)劑奠定了基礎(chǔ)。結(jié)果表明，仿刺參糖胺聚糖能夠顯著的促進(jìn)DC細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子IL-12的分泌。此外，還能促進(jìn)CIK細(xì)胞的增殖和IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌水平。
　　本論文的