瓜蔞多糖的提取、純化及其抗氧化、斑馬魚心臟保護(hù)活性研究.pdf

1、瓜蔞（Trichosanthes kirilowii Maxim.），屬于葫蘆科栝樓屬（Trichosanthes Linn.），多年生攀援草本，是山東著名道地藥材，具有解熱祛痰，化瘀理氣，清腸通便等藥理活性，在治療胸痹、便秘等方面效果較佳。瓜蔞多糖（Trichosanthes kirilowii Maxim. polysaccharide，簡稱TKMP）是瓜蔞中的重要組分，大量研究表明，多糖在抗氧化、抗腫瘤、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等方面展現(xiàn)

2、出誘人的前景。據(jù)文獻(xiàn)調(diào)研，目前國內(nèi)外對瓜蔞多糖少有研究。本研究主要進(jìn)行了瓜蔞多糖的提取工藝、黏度特性、分離純化及其抗氧化和心臟毒性保護(hù)活性等方面的研究，為瓜蔞多糖進(jìn)一步開發(fā)利用提供理論支持。主要研究成果如下：
　　1. TKMP最佳提取工藝的確定：以單因素試驗作為正交試驗設(shè)計的依據(jù)，對TKMP超高壓提取最佳工藝條件進(jìn)行研究，最終得出在以水為提取溶劑，提取壓力為100 Mpa，提取時間3 min，料液比為1：40（g/mL）的條件下

3、，多糖得率最高，為19.11％，比HRE法低0.32%，UAE法高1.00%，但提取時間卻僅為HRE法和UAE法的1/10和1/20。
　　2. TKMP的黏度特性研究：分別探討了采用UPE法和HRE法提取的TKMP溶液的濃度、溫度、pH值及不同金屬離子對其黏度的影響，結(jié)果顯示：TKMP是一種低黏度多糖，上述各因素對其黏度均有一定的影響。溶液濃度與黏度呈正相關(guān)；溶液溫度與黏度呈負(fù)相關(guān)；酸堿和金屬離子對其黏度的影響不大，說明該多糖性

4、質(zhì)比較穩(wěn)定。采用UPE法提取的多糖溶液黏度略低于HRE法。
　　3. TKMP的分離純化及其初級結(jié)構(gòu)表征：TKMP首先采用Sevage法脫蛋白，然后進(jìn)行DEAE-52纖維素柱層析，分別用0、0.05 M、0.1M、0.2M的NaCl洗脫，得到相應(yīng)的四個組分TKMP-1、TKMP-2、TKMP-3、TKMP-4，對含量最高的組分TKMP-1采用Sephadex G-75柱層析進(jìn)一步分離純化，用蒸餾水洗脫，得到兩個組分TKMP-1-1

5、、TKMP-1-2，經(jīng)HPGPC法鑒定，TKMP-1-2為均一穩(wěn)定的純品，其分子量為12KDa。GC-MS結(jié)果顯示：TKMP-1-2單糖組成及其摩爾比為：L-阿拉伯糖：D-甘露糖=1：2.72。TKMP-1-2是一種典型的多糖類化合物，其糖環(huán)為呋喃環(huán)，有α-型糖苷鍵和β-型糖苷鍵兩種連接方式。
　　4. TKMP體外抗氧化活性研究：通過測定TKMP對DPPH·、σ2·、·OH、H2O2的清除率及總還原能力，考察TKMP的體外抗氧化

6、活性。結(jié)果表明：DPPH·、σ2·、·OH、H2O2的清除率均具有濃度依賴性，IC50值分別為0.63 mg/mL、1.48 mg/mL、4.04 mg/mL、1.03 mg/mL，總還原力與TKMP濃度呈正相關(guān)，當(dāng)TKMP濃度為0.5mg/mL時，還原能力達(dá)到最大。純化組分TKMP-1-2對DPPH·、O2?·的清除效果不如粗多糖好。
　　5. TKMP對特非那定誘導(dǎo)的斑馬魚心臟毒性保護(hù)活性研究：實驗分為低劑量組（1μg/mL）