從肝素生產(chǎn)廢棄物中分離純化硫酸皮膚素及其功能性評(píng)價(jià).pdf

1、硫酸皮膚素(Dermatan sulfate，DS)是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)一種重要的黏多糖，本文旨在研究從肝素生產(chǎn)廢棄物中分離純化DS的方法，并對(duì)其抗氧化與護(hù)膚作用進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　本文采用sevag法、凝膠過濾層析法、CPC西吡氯銨法、有機(jī)試劑分級(jí)沉淀結(jié)合弱陰離子交換色譜法對(duì)肝素生產(chǎn)廢棄物中的DS進(jìn)行純化，篩選了乙醇、丙醇、丙酮三種沉淀劑進(jìn)行分級(jí)沉淀。結(jié)果顯示sevag法、凝膠過濾層析法和CPC西吡氯銨法的純化效果較差。沉淀劑篩選時(shí)通過對(duì)各

2、沉淀級(jí)分的醋酸纖維素薄膜電泳結(jié)果進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)丙酮法效果最好，級(jí)分14與15中DS含量占三種黏多糖組分的100％，隨后通過DEAE-650S弱離子交換層析進(jìn)一步分離，樣品經(jīng)紅外光譜(IR)與核磁共振(NMR)鑒定、高效凝膠滲透色譜法(HPGPC)測(cè)定純度，證明得到了高純度的DS，產(chǎn)品純度為94.29％，相對(duì)于未處理原料的提取率為1.91％。
　　利用硫酸軟骨素ABC酶將DS樣品酶解，強(qiáng)陰離子交換高效液相色譜(SAX-HPLC)對(duì)酶

3、解所得二糖檢測(cè)，結(jié)果表明樣品DS主要二糖重復(fù)單元為2-乙酰氨基-2-脫氧-3-O-4-O-磺基-D-半乳糖(△di-4S)，還含有少量的2-乙酰氨基-2-脫氧-3-O-D-半乳糖(△di-0S)和2-乙酰氨基-2-脫氧-3-O-6-O-磺基-D-半乳糖(△di-6S)，三種不飽和二糖△di-0S、△di-6S和△di-4S的摩爾比為1.0∶1822.5∶62707.2，進(jìn)一步驗(yàn)證該樣品為DS而非其它黏多糖。高效凝膠滲透色譜法(HPGPC

4、)測(cè)定樣品DS的分子量為80220。
　　研究了用于評(píng)價(jià)羥基自由基清除能力的Fenton-羅丹明B反應(yīng)體系中H2O2濃度、FeSO4濃度、H2SO4濃度對(duì)體系穩(wěn)定時(shí)間的影響并修正反應(yīng)條件，評(píng)價(jià)了樣品DS對(duì)羥基自由基的清除能力并與抗壞血酸(VC)進(jìn)行對(duì)比，兩者的半抑制濃度IC50分別為0.288g/L與0.199g/L。修正了用于評(píng)價(jià)超氧陰離子自由基清除能力的鄰苯三酚體系的反應(yīng)條件，評(píng)價(jià)了樣品DS清除超氧陰離子自由基能力并與超氧化物

5、歧化酶(SOD)對(duì)比，兩者的半抑制濃度IC50分別為0.121g/L與0.017g/L。
　　利用Corneometer體內(nèi)法分別對(duì)不同濃度的DS和硫酸軟骨素(CS)配方啫喱進(jìn)行了皮膚保濕功效評(píng)價(jià)，并與透明質(zhì)酸(HA)的保濕效果進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果表明在涂抹0.05％DS、0.1％DS、0.3％DS配方啫喱4h內(nèi)，志愿者皮膚水分含量平均值增加明顯(p＜0.05)，皮膚水合率分別上升至37.85％、42.25％和44.90％，表明該濃度下

6、DS保濕效果明顯，且優(yōu)于HA;而涂抹0.05％CS、0.1％CS、0.3％CS配方暗喱4h內(nèi)，志愿者皮膚水分含量平均值增加明顯(p＜0.05)，表明該濃度下CS保濕效果明顯，皮膚水合率分別上升至37.72％、41.79％和44.65％，且優(yōu)于HA。DS與CS相比使用后皮膚水合率變化差異性不明顯，因此兩者保濕效果差異不明顯。
　　采用人體皮膚丹磺酰氯染色法，評(píng)價(jià)了DS和CS配方乳液對(duì)促進(jìn)皮膚角質(zhì)代謝（剝脫）的效果。結(jié)果表明每日兩次涂