利用人體腸道菌發(fā)酵豆芽制備雌馬酚的研究.pdf

1、雌馬酚是大豆異黃酮重要的代謝終產(chǎn)物，由黃豆苷元在體內(nèi)某些特定腸道菌的作用下特異性代謝得到，具有較異黃酮前體更高的生物活性，并且性質(zhì)穩(wěn)定，容易被人體吸收。臨床數(shù)據(jù)表明，雌馬酚具有預(yù)防乳腺癌、預(yù)防心血管疾病、骨質(zhì)疏松，改善更年期綜合征，保護(hù)神經(jīng)以及抗衰老等方面有重要的功效。
　　 雌馬酚的產(chǎn)出受到多種因素的影響，包括宿主基因，飲食習(xí)慣，藥物作用等方面。本實(shí)驗(yàn)利用兩名雌馬酚產(chǎn)生者的菌群進(jìn)行體外代謝，探討了十種常見抗生素對于雌馬酚代謝產(chǎn)

2、生的影響，發(fā)現(xiàn)鹽酸環(huán)丙沙星對雌馬酚產(chǎn)出抑制作用最小，頭孢曲松、鹽酸多西環(huán)素以及土霉素基本完全抑制，其他抗生素對于兩個這來源的菌群作用存在差異。
　　 本實(shí)驗(yàn)室課題組在前期工作中已成功地從女性體內(nèi)篩選到兩株可產(chǎn)生雌馬酚的腸道菌，分別為屎腸球菌HY-1，以及Slackia屬菌株HY-2，本實(shí)驗(yàn)以提高兩株菌代謝產(chǎn)出雌馬酚的能力為目的，對HY-1、HY-2的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，并且在BHI培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上對培養(yǎng)基成分進(jìn)行調(diào)整，通過兩株菌轉(zhuǎn)

3、化黃豆苷元的特性，利用豆芽發(fā)酵，進(jìn)行雌馬酚粗提取工藝的研究。
　　 首先對HY-1，HY-2純培養(yǎng)與混合培養(yǎng)方式中雌馬酚的產(chǎn)量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)混合培養(yǎng)后雌馬酚的產(chǎn)量有所提高，確定混合培養(yǎng)兩株菌的接種比例，通過單因素實(shí)驗(yàn)對混合培養(yǎng)的生長條件進(jìn)行篩選，并且利用正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，優(yōu)化后得到的最佳生長條件為:HY-1，HY-2以1∶1的比例接種，接種量為4％，培養(yǎng)基初始PH值為7.0，發(fā)酵溫度為38℃。未優(yōu)化前，HY-1單獨(dú)培養(yǎng)產(chǎn)量為0.25

4、μg/mL、0.361μg/mL，優(yōu)化后得到雌馬酚濃度為0.6μg/mL，濃度分別提高了1.31倍、0.67倍。
　　 以BHI培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過單因子實(shí)驗(yàn)，對補(bǔ)充的碳源、氮源、無機(jī)鹽及生長因子初步篩選，得到能夠提高雌馬酚產(chǎn)量的影響因素，采用Plackett-Burman設(shè)計對影響因素進(jìn)行考察，確定乳糖、檸檬酸、硝酸鈉對菌株產(chǎn)生雌馬酚的影響顯著。利用最陡爬坡實(shí)驗(yàn)確定出顯著因素的最佳取值區(qū)域，采用Box-Benhnken中

5、心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計及響應(yīng)面分析確定最佳條件。結(jié)果表明，補(bǔ)充最佳培養(yǎng)基的組成為:BHI腦心浸液38g/L，乳糖2.59g/L，檸檬酸1.48 g/L，硝酸銨1.26 g/L．硫酸銨1.25 g/L，磷酸氫二鉀0.5 g/L，硫酸二氫鉀0.4 g/L，L-半胱氨酸0.06 g/L，驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)得到雌馬酚濃度為1.47μg/mL，較未優(yōu)化前提高了1.45倍。
　　 以實(shí)驗(yàn)得到的最佳培養(yǎng)基組成及最佳生長條件為基礎(chǔ)，利用HY-1、HY-2對豆芽粉