基于金磁-量子點雙標(biāo)記的牛乳酪蛋白快速免疫檢測新方法研究.pdf

1、近年來，隨著人們的生活水平日漸提高以及牛乳制品的廣泛普及，牛乳過敏問題得到了人們的廣泛關(guān)注。本論文將量子點良好的光學(xué)特性與金磁微粒可被快速富集的優(yōu)勢相結(jié)合，建立了基于金磁-量子點雙標(biāo)記的牛乳酪蛋白快速免疫檢測的新方法，主要開展了以下幾個方面的工作：
　　一、以巰基乙酸為穩(wěn)定劑，采用水相合成法成功制備了表面帶有羧基的綠、黃、橙、紅四種熒光顏色的CdTe量子點；采用一鍋法合成了氨基化的磁性復(fù)合微粒（Fe3O4-PEI），通過兩次包金過

2、程，得到了多層復(fù)合型金磁納米微粒（Fe3O4-PEI-Au1-PEI-Au2）。并對其相關(guān)性能進行了表征與測試，實驗結(jié)果表明，所制備的量子點具有良好的光學(xué)性能，其激發(fā)光譜寬且連續(xù)，發(fā)射光譜窄而對稱，熒光強度較高、且不易聚沉；所制備的金磁微粒粒徑均一，具有良好的分散性和晶體結(jié)構(gòu)且磁性好，能很好的用于磁性分離和生物修飾，為本論文后續(xù)的拓展與應(yīng)用研究提供了保證。
　　二、以橙色CdTe量子點為代表，小鼠IgG作為模式抗原，兔抗鼠IgG和

3、羊抗鼠IgG均作為模式抗體，可與小鼠 IgG上的不同位點相結(jié)合。其中，羊抗鼠IgG偶聯(lián)CdTe量子點得到熒光探針，兔抗鼠IgG偶聯(lián)金磁微粒得到金磁探針，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了金磁-量子點雙標(biāo)記快速免疫檢測體并優(yōu)化了兩探針的合成條件。金磁探針與小鼠IgG相結(jié)合，并結(jié)合量子點熒光探針上的兔抗鼠IgG，最終形成“三明治”式的復(fù)合物。根據(jù)復(fù)合物上熒光強度的大小，從而實現(xiàn)對小鼠IgG的定量檢測。實驗結(jié)果表明，在優(yōu)化的探針條件下，小鼠IgG的量與熒光檢測

4、信號呈正相關(guān)。由此說明基于金磁-量子點雙標(biāo)記免疫檢測體系成立，有望用于實際樣品檢測中。
　　三、在之前研究的基礎(chǔ)上，采用兩種可與牛乳酪蛋白不同作用位點結(jié)合的抗體，將其中單克隆抗體修飾到金磁微粒上作為捕獲探針，多克隆抗體修飾到量子點上作為熒光檢測探針，建立了一種基于“三明治夾心式”的牛乳酪蛋白免疫檢測新方法，并用于牛乳過敏原的實際檢測。結(jié)果得到酪蛋白含量在6.25~100ng/mL范圍內(nèi)與熒光強度具有良好的線性關(guān)系，最低檢出限為1.