基于金納米粒子標(biāo)記的生物分析新方法研究.pdf

1、金納米顆粒由于其獨特的物理化學(xué)性質(zhì)和良好的生物相容性備受研究者的青睞。近年來,金納米顆粒作為一種優(yōu)異的光學(xué)探針廣泛用于生化分析和診斷治療等領(lǐng)域。本論文基于金納米顆粒的高散射特性,以金納米顆粒為標(biāo)記探針,發(fā)展了免疫分析甲胎蛋白(AFP)和核酸適配體測定凝血酶的新方法,主要工作如下:
　　AFP是一種癌癥標(biāo)志物,其臨床檢測在肝癌診斷中具有極重要的意義。我們采用磁珠-金納米粒子夾心免疫分析模型,和共振散射光譜檢測方法,建立了AFP免疫分

2、析新方法。首先將兩種抗體分別與磁珠和金納米粒子連接。當(dāng)抗體修飾的磁珠和金納米粒子加入到含有AFP的樣品中,夾心免疫復(fù)合物將會生成。利用磁珠的恒久磁分離性將夾心復(fù)合物與未反應(yīng)的金納米探針簡便分離,用共振散射光譜來測定金納米探針在特定波長下的共振散射光強(qiáng)度,從而間接測定靶目標(biāo)AFP的濃度。我們優(yōu)化了如抗體修飾比例、磁珠濃度、金納米探針濃度等實驗條件的影響。在優(yōu)化的條件下,夾心反應(yīng)中游離金納米探針的共振散射光強(qiáng)度與AFP的濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)

3、系。該方法的線性范圍為13.6 pM~436 pM,最低檢測限達(dá)13.6 pM。進(jìn)而,該方法成功地用于健康人和癌癥病人血清中AFP的濃度的測定。同時,該方法與標(biāo)準(zhǔn)方法ELISA實驗結(jié)果進(jìn)行對照,結(jié)果表明兩種方法基本一致。我們的方法將有望應(yīng)用于AFP含量測定的臨床診斷,對于癌癥前期診斷治療大有裨益。
　　基于aptamer分子識別原理和單個納米粒子計數(shù)方法,我們發(fā)展了均相分析凝血酶的新方法。我們將兩種能與凝血酶特異性結(jié)合的核酸適配體

4、 aptamer標(biāo)記到金納米顆粒表面。將金納米粒子修飾的aptamer加入到含有凝血酶的樣品中,aptamer將與凝血酶反應(yīng),生成夾心復(fù)合物(二聚體甚至多聚體),因而導(dǎo)致溶液中金納米粒子的個數(shù)的減少,單個納米粒子計數(shù)器能夠根據(jù)微區(qū)中光子爆發(fā)數(shù)減少進(jìn)行測定。我們在本課題組針對單顆粒計數(shù)法的研究的基礎(chǔ)上做了數(shù)據(jù)處理方面的改進(jìn)使獲得的數(shù)據(jù)更為可靠,并考察了金納米探針修飾比例、凝血酶與aptamer的反應(yīng)時間、單顆粒計數(shù)法的檢測時間等實驗條件,