局部醛固酮系統(tǒng)在高糖致人系膜細(xì)胞損傷記憶效應(yīng)中的作用.pdf

1、目的：研究高糖記憶對(duì)人系膜細(xì)胞(HMCs)表達(dá)局部醛固酮系統(tǒng)、活性氧(ROS)及癌胚纖維連接蛋白(oncofetal FN)mRNA水平的影響，并進(jìn)一步探討局部醛固酮系統(tǒng)在其中的作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)細(xì)胞分組如下：正糖組(NG，5 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天)、高糖組(HG，25 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天)、記憶組(M，25 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天→5 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)4天)、記憶+依普利酮組(

2、MY，25 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天→5 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮培養(yǎng)4天)、正糖+依普利酮組(NY，5 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天→5 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮培養(yǎng)4天)、持續(xù)正糖組(SN，5mmol/L D.葡萄糖培養(yǎng)6天)。以RT-PCR法檢測(cè)醛固酮合酶(CYP1182)、11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅱ(11βHSD2)、ontofetal FNmRNA表達(dá)水平，Wes

3、tern-blot檢測(cè)CYP1182蛋白表達(dá)水平，放射免疫法分析細(xì)胞培養(yǎng)液醛固酮水平，激光共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察鹽皮質(zhì)激素受體(MR)蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)位，熒光顯微鏡和酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平。
　　結(jié)果：(1)與NG組對(duì)比，HG組和M組誘導(dǎo)人系膜細(xì)胞CYP11B2mRNA及蛋白分別為NG組的3.45倍、2.09倍和3.14倍、2.06倍，HG組和M組細(xì)胞上清液醛固酮含量分別為NG組的2.01倍、1.81倍(P值均<0.05)，

4、HG組和M組均可促進(jìn)MR蛋白發(fā)生核轉(zhuǎn)位，定量分析示HG組和M組胞漿/胞核熒光強(qiáng)度較正糖組分別降低30％、21％(P值均<0.05)。(2)HG組和M組oncofetal FN mRNA、ROS表達(dá)增加，分別為NG組的2.23倍、1.99倍和2.16倍、1.90倍(P值均<0.05)，MY組ROS、oneofetal FN mRNA表達(dá)較M組顯著下調(diào)，分別較M組降低35％、51％(P值均<0.05)。
　　結(jié)論：HMCs存在高糖記憶