Caveolae在高糖-TGF-β誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細胞細胞外基質(zhì)合成的作用.pdf

1、目的：
　　 探討Caveolae在高糖(High glucose，HG)及轉(zhuǎn)化生長因子β1（Transforinggrowth factor，TGF-β1）誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細胞(MCs)細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)合成過程中的作用并探討其潛在的作用機制。
　　 方法：
　　 傳代培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細胞(MCs)同步化后分為:(1)正常糖(NG)組;(2)高糖(HG)組;各

2、組繼續(xù)培養(yǎng)細胞0、12、24、48h。不同濃度的葡萄糖/TGF-β1分別處理細胞1.5h，各組滲透壓均用甘露醇調(diào)整至30mmol/L以避免滲透壓不同對實驗結(jié)果造成的干擾。30mmol/L的葡萄糖短時處理細胞0-3h。經(jīng)甲基-β-環(huán)糊精(β-MCD)預(yù)處理1h的系膜細胞再分為兩組:(3)HG+β-MCD組;(4)HG+β-MCD+膽固醇(Cholestrol)組，各組繼續(xù)培養(yǎng)細胞1、12、24、48h.用Western bloting檢測

3、小凹蛋白1（Cav-1）、磷酸化小凹蛋白1(p-cav-(l)y14)、1型膠原(Col-1)蛋白的表達水平，用實時定量PCR檢測細胞中Cav-1 mRNA表達變化，用ELISA方法檢測上清中纖維連接蛋白(FN)的蛋白含量。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常糖組相比，高糖或TGF-β1處理不同時間點FN濃度均顯著增加（均P＜0.01）;與HG0h組相比，高糖培養(yǎng)各時間點Col-1蛋白表達明顯增多(P＜0.05);與TGF-