銀杏葉提取物抑制高糖培養(yǎng)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞肥大和細(xì)胞外基質(zhì)的堆積.pdf

1、目的:1.研究銀杏葉提取物(extract of ginkgo biloba,GBE)對(duì)高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞(mesangial cell,MC)細(xì)胞周期的影響，進(jìn)而明確其是否有抑制細(xì)胞肥大作用。 2.以卡托普利為對(duì)照藥，探索GBE對(duì)Ⅳ型膠原和層粘蛋白、Smad2／3蛋白、Smad7蛋白、TGF-β<,1>mRNA的影響，也即對(duì)TGF-β<,1>/Smads信號(hào)異常所致的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix

2、，ECM)表達(dá)增多的作用。 3.探索GBE對(duì)高糖培養(yǎng)的MC氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響及后者與ECM的關(guān)系，從而進(jìn)一步探索GBE對(duì)氧化應(yīng)激與TGF-β<,1>／Smads信號(hào)異常這兩者引起的ECM堆積之間的關(guān)系。 方法: 1.大鼠腎小球系膜細(xì)胞株的培養(yǎng)。大鼠MC分為正常對(duì)照組、溶媒對(duì)照組、高糖組、GBE低濃度組，GBE中濃度組，GBE高濃度組，卡托普利對(duì)照組。 2.流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期。 3.免疫細(xì)胞化

3、學(xué)測定Smad2／3蛋白和Smad7蛋白。 4.放射免疫法測定細(xì)胞漿內(nèi)的Ⅳ型膠原和層粘蛋白(即ECM)。 5.RT-PCR法測定細(xì)胞TGF-β<,1>mRNA表達(dá)。 6可見光分光光度法測定胞漿CAT,GSH-Px,T-AOC和T-SOD四大抗氧化指標(biāo)的水平。 結(jié)果： 1.與高糖組相比，GBE低中高濃度組的G<,o>／G<,1>期均有顯著降低，S期細(xì)胞比例也分別有不同程度的升高(P<0.05 or

4、P<0.01)，這種改變是濃度依賴性(│r│)0.999)?？ㄍ衅绽M未見顯著性作用。 2.與高糖組相比，GBE低中高濃度組均大大降低了細(xì)胞內(nèi)Smad2／3蛋白的表達(dá)；高濃度組GBE顯著性增加細(xì)胞內(nèi)Smad7蛋白的表達(dá)(P<0.01)。GBE低中高濃度組層粘蛋白的表達(dá)有顯著性降低，與高糖組相比皆有顯著性差異(P<0.05 orP<0.01)；GBE中高濃度組的Ⅳ型膠原有顯著性降低。GBE高濃度組的TGF-β<,1>mRNA的表達(dá)

5、較高糖組顯著性降低(P<0.05)。卡托普利組可明顯降低Ⅳ型膠原和層粘蛋白的含量及TGF-β<,1>RNA的含量(P<0.05 or P<0.01)。 3. GBE高和(或)中濃度組顯著提高了胞漿CAT，GSH-Px，T-AOC和T-SOD的水平，卡托普利僅提高CAT，GSH-Px的水平。 結(jié)論: 1. GBE在大鼠MC上具有升高細(xì)胞的S期百分?jǐn)?shù)，從而抑制細(xì)胞肥大，具有保護(hù)細(xì)胞作用。 2.GBE能明顯抑制

6、高糖環(huán)境下TGF-β<,1>／Smads信號(hào)異常所致的Ⅳ型膠原和層粘蛋白的大量表達(dá)。 3.GBE有很強(qiáng)的抗氧化和抗纖維化能力。 4.GBE一方面通過其抗氧化作用抑制了TGF-β<,1>／Smads信號(hào)的異常；另一方面通過其抑制TGF-β<,1>／Smads信號(hào)作用而抑制氧化應(yīng)激的產(chǎn)生，兩者共同抑制了ECM的表達(dá)。 總之，相對(duì)于對(duì)照藥卡托普利，GBE對(duì)以上指標(biāo)的作用更為廣泛。GBE能抑制高糖培養(yǎng)的MC的肥大和ECM