雙配體修飾殼聚糖藥物載體的合成及肝靶向性能研究.pdf

1、目前,國(guó)內(nèi)外關(guān)于肝靶向給藥系統(tǒng)中藥物載體的研究主要集中在單配體修飾的載藥納米粒子方面。然而,單個(gè)配體修飾的納米粒子在進(jìn)行受體-配體相互作用時(shí)易受到許多病理及生理?xiàng)l件的變化而變化,這種變化會(huì)導(dǎo)致受體特異性識(shí)別能力和結(jié)合活性降低,針對(duì)這種情況,本文提出了一種雙配體修飾的藥物載體材料,期望能提高主動(dòng)靶向的可靠性,豐富肝靶向給藥系統(tǒng)的內(nèi)容。
　　 本文將具有肝靶向性的配體甘草次酸(GA)和乳糖酸(LA)偶聯(lián)到殼聚糖(CTS)上,首次成功

2、合成了雙配體修飾殼聚糖材料—乳糖酸化甘草次酸殼聚糖(GCGA),該材料結(jié)構(gòu)未見文獻(xiàn)報(bào)道。通過MTT實(shí)驗(yàn)考察了材料的細(xì)胞毒性,并用FITC標(biāo)記的殼聚糖納米粒子(FITC-CTS NPs)、甘草次酸殼聚糖納米粒子(FITC-GA-CTS NPs)和GCGA納米粒子(FITC-GCGA NPs)研究了GCGA肝靶向性能,并分析了GCGA NPs的主動(dòng)靶向機(jī)制。在中心復(fù)合設(shè)計(jì)研究中,優(yōu)化了GCGA/5-Fu NPs的制備條件,探討了GCGA/5

3、-Fu NPs的體外釋放特性。得到如下結(jié)論:
　　 (1)紅外光譜(IR)、核磁共振氫譜(1H-NMR)、接觸角測(cè)試和MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GA和LA通過酰胺鍵成功連接到CTS,取代度分別為13.77mol％和16.74mol%;GCGA是一種親水性較強(qiáng)的具有疏水性GA基團(tuán)和親水性LA基團(tuán)的兩親性藥物載體材料,可通過自組裝法得到納米粒子;GCGA對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞的(L929)的毒性與其濃度的高低具有一定的關(guān)系,GCGA的濃度在0.

4、005-0.05mg/ml范圍內(nèi)時(shí),無細(xì)胞毒副作用。
　　 (2)體外細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,FITC-GCGA NPs進(jìn)入肝癌細(xì)胞和去唾液酸糖蛋白受體(ASGP-R)及甘草次酸受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用有關(guān),當(dāng)一種受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用因某種病理生理原因受阻時(shí),還有另一種配體-受體的相互作用,增加了細(xì)胞的攝取途徑;BEL-7402肝癌細(xì)胞攝取GCGA納米粒子的量是LO2正常肝細(xì)胞的18.22倍,GCGA納米粒子對(duì)肝癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的親和性。大

5、鼠體內(nèi)分布研究顯示,FITC-GCGA NPs對(duì)心、腦和骨骼肌沒有毒副作用,而且較FITC-CTS NPs和FITC-GA-CTS NPs,FITC-GCGA NPs主要在大鼠肝臟富集,具有更強(qiáng)的肝靶向性。因此,GCGA可以作為一種有應(yīng)用前景的肝癌靶向性藥物載體材料。
　　 (3)中心復(fù)合設(shè)計(jì)優(yōu)化CTS載5-Fu納米粒子(CTS/5-Fu NPs)的平均粒徑和載藥量,以及以此為模型,制備了GCGA/5-Fu NPs,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明

6、:5-Fu/CTS對(duì)平均粒徑和載藥量具有顯著的影響;GCGA/5-Fu NPs的形貌均呈圓整球形,平均粒徑為239.9nm(分布范圍在100-500nm),分布均勻(多分散指數(shù)為0.04),zeta電位為+21.2mV,載藥量為3.90%(w/v)。GCGA/5-Fu NPs體外釋放研究結(jié)果顯示,GCGA/5-Fu NPs在PBS緩沖溶液(pH=7.4)釋放過程大致分為四個(gè)階段,即突釋、緩釋、二次突釋,最后是一個(gè)非常緩慢的釋放階段。其緩