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文檔簡介
1、防御素是具有廣譜殺菌活性的陽離子短肽,在哺乳動物中廣泛分布,但自然提取防御素成本極高,且產(chǎn)量極低,所以作為產(chǎn)品,通過基因工程的途徑是必然的選擇.本論文通過單細胞真核藻類高效表達系統(tǒng)的建立,將抗菌譜較為廣泛的人防御素HNP-1基因轉(zhuǎn)入綠藻,旨在綠藻中生產(chǎn)防御素.為基因工程生產(chǎn)新型抗生素-防御素奠定基礎(chǔ).本文由反轉(zhuǎn)錄PCR方法(RT-PCR)從人體外周血的總RNA中獲得編碼人α-防御素-l(α-HNP-1)的cDNA.將α-HNP-1克隆到
2、載體pMD18-T中,獲得克隆載體pMD18-T/HNP-1.將其熱轉(zhuǎn)化至E. coli JM109中,獲得了α-HNP-1的cDNA克隆.選擇微綠球藻、亞心形扁藻作為表達宿主.研究了他們對抗生素的敏感性,結(jié)果亞心形扁藻對氯霉素,微綠球藻對卡那霉素表現(xiàn)出敏感性,其敏感濃度皆為50μg/ml.選擇pBI121為表達載體,構(gòu)建了兩個表達系統(tǒng).亞心形扁藻以氯霉素為抗性標記基因,工作濃度為50μg/ml,微綠球以卡那霉素為抗性標記基因,工作濃度
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