Notch1-Jagged1在涎腺腺樣囊性癌中表達(dá)的研究.pdf

1、Notch信號傳導(dǎo)通路是近年來的腫瘤研究熱點(diǎn)之一，相鄰細(xì)胞間通過Notch受體傳遞信號可以調(diào)節(jié)包括干細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞的分化、增殖和凋亡，影響組織和器官的形成和發(fā)育。Notch信號傳導(dǎo)通路中某些分子的基因突變與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。文獻(xiàn)報道Notch在多數(shù)腫瘤中起癌基因作用，但也有少數(shù)腫瘤中起抑癌基因作用，即使在同一腫瘤的不同階段Notch受體所起的作用是不一樣甚至相反的。Notch配體Jagged在各腫瘤中的作用也不是完全清楚，

2、研究發(fā)現(xiàn)也存在雙重作用。因此分清Notch在特定腫瘤中的作用是有必要的。從Kunnimalaiyaan的文獻(xiàn)報道的列表中可以清楚的看到，像胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌等等中Notch1為致癌基因，而像甲狀腺髓樣癌、小細(xì)胞肺癌等等為抑癌基因。 在哺乳類動物中已發(fā)現(xiàn)有4個同源Notch受體，分別為Notch1～4；5個同源配體，為Delta樣配體，分別是D111、D113、D114，和Serrate樣配體，分別是Jagged1、Jagge

3、d2。Jagged1配體可與Notch1配體結(jié)合。Notch1和Jagged1在腫瘤中表達(dá)水平與腫瘤的侵襲性、復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移、臨床預(yù)后等相關(guān)的研究較多。如Callahan通過檢測乳腺腫瘤中Jagged1的mRNA和蛋白水平后認(rèn)為表達(dá)水平的升高可預(yù)測腫瘤發(fā)生過程中Notch信號的增加。Thurston發(fā)現(xiàn)在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中，Jaggel表達(dá)增加導(dǎo)致腫瘤相關(guān)微環(huán)境中的Notch信號增強(qiáng)，從而激活腫瘤細(xì)胞，認(rèn)為對于促進(jìn)癌癥發(fā)展Jagge1表

4、達(dá)增加起著重要作用。Notch1和Jagged1在涎腺腫瘤以及SACC中起什么樣的作用，查閱國內(nèi)外文獻(xiàn)，報道文獻(xiàn)很少。 因此我們研究Notch1和Jagged1在SACC發(fā)生發(fā)展中的作用，探討其與臨床分期的相關(guān)性以及與復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移之間的聯(lián)系，為SACC的早期診斷提供更有效的分子標(biāo)記，同時為尋找有效治療靶點(diǎn)供理論依據(jù)。 研究目的： 通過檢測Notch1和Jagged1在SACC高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系以及組織標(biāo)本中的表達(dá)，分析

5、表達(dá)與患者臨床分期、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的相關(guān)性，探討Notch1和Jagged1在SACC發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法： 1.將ACC—M、ACC—2細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，部分細(xì)胞做細(xì)胞爬片后進(jìn)行免疫熒光染色，確定蛋白表達(dá)部位。一抗為山羊抗人Notch1、Jagged1多克隆抗體； 2.提取兩種細(xì)胞的RNA，調(diào)整至相同濃度后逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，實(shí)時定量PCR測Notch1、Jagged1基因水平，分析表達(dá)差異； 3.提取兩種

6、細(xì)胞總蛋白，Western blotting分析Notch1、Jagged1蛋白的表達(dá)，BandScan軟件半定量分析表達(dá)差異。 4.免疫組織化學(xué)SABC法檢測32例涎腺腺樣囊性癌(SACC)、20例涎腺多形性腺瘤(SPA)、10例腮腺組織中Notch1、Jagged1蛋白表達(dá)，運(yùn)用ImagePro．Plus6.0軟件對各切片5個高倍鏡下隨機(jī)視野的圖片測其累積光密度(IOD)值，采用SPSS13.0軟件對結(jié)果進(jìn)行檢驗(yàn)，分析檢驗(yàn)結(jié)

7、果。統(tǒng)計分析SACC早期與晚期組、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與無復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組等IOD值差異的意義。 結(jié)果： 1.免疫熒光染色可見Notch1、Jagged1蛋白在兩種細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)，其中Notch1的表達(dá)均較弱或疑似表達(dá)。 2.實(shí)時定量PCR結(jié)果表明，ACC—M中Notch1、Jagged1 mRNA均高于ACC—2，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.Western blotting檢測發(fā)現(xiàn)，Jagged1在兩種細(xì)胞系中的表達(dá)有明顯差

8、異，與mRNA表達(dá)一致；然而Notch1在兩種細(xì)胞系中均未見表達(dá)。 4.Jagged1蛋白在正常腮腺、SPA、SACC組織中的表達(dá)水平不同，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；在晚期SACC組織中的表達(dá)水平明顯高于早期；發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的病例組中表達(dá)明顯高于無復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計意義(P<0.05)。Notch1在正常腮腺組織中有表達(dá)，分布于腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中，而在SPA及各類型SACC組織中均未見表達(dá)。 結(jié)論： 在高低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系