應(yīng)用多重PCR及實時熒光PCR方法鑒別食品中肉類成分.pdf

1、肉與肉制品摻假是食品質(zhì)量控制面臨的重要挑戰(zhàn)。食品中肉類成分的鑒別與分析技術(shù)已逐步形成了以核酸檢測為基礎(chǔ)的方法體系，其鑒別精度可達屬與亞屬水平。本研究主要利用多重PCR技術(shù)鑒別市場上常見的豬肉、牛肉、雞肉、羊肉，另外，本研究還建立了添加有擴增內(nèi)標(biāo)的食品中豬肉和雞肉成分的實時熒光PCR檢測方法。具體研究和結(jié)果如下:
　　1.建立快速可靠的用于食品中4種肉類成分（雞、牛、羊、豬）快速鑒別的通用引物多重PCR(Universalprime

2、rs-multiplexPCR，UP-M-PCR)方法?；趧游锞€粒體細(xì)胞色素b基因的差異性位點，設(shè)計兩組各5條長度不同的多重PCR引物，建立并優(yōu)化多重PCR反應(yīng)體系，通過電泳檢測擴增產(chǎn)物分子量差異實現(xiàn)4種肉類的快速鑒別;應(yīng)用優(yōu)化的多重PCR方法對80份市售食品樣本進行盲樣檢測，驗證鑒別方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果顯示，在優(yōu)化的反應(yīng)條件下，選擇特異性高、序列較長的多重PCR引物可有效地進行食品中豬、牛、羊、雞源性成分的快速鑒定，檢測靈敏度達到皮克

3、級DNA;對市售食品樣本的鑒別驗證了方法的實用價值。該方法精確穩(wěn)定，可用于食品中多種動物源性成分的快速鑒別。
　　2.建立含有擴增內(nèi)標(biāo)(IAC，Internalamplificationcontrol)的用于食品中豬肉和雞肉成分鑒別的Taqman探針實時熒光PCR檢測方法。分別基于豬的betaactin基因和雞的transforminggrowthfactor基因設(shè)計引物和探針;考察引物和探針的特異性與靈敏度;設(shè)計并構(gòu)建擴增內(nèi)標(biāo)，

4、優(yōu)化體系中擴增內(nèi)標(biāo)濃度，建立內(nèi)標(biāo)實時熒光PCR體系;使用該檢測體系對生肉和熟肉來源的DNA模板進行檢測評價;應(yīng)用該體系對市售38份樣本進行盲樣檢測。結(jié)果顯示，含有擴增內(nèi)標(biāo)的Taqman探針實時熒光PCR體系能有效地進行食品中豬肉和雞肉成分的快速檢測，非目標(biāo)物種在40個循環(huán)內(nèi)均無出現(xiàn)擴增，檢出限均為0.5ngDNA;該體系對生肉和熟肉來源的DNA模板檢測無顯著差異;對市售食品樣本的鑒別驗證了方法的實用價值。因此，該方法準(zhǔn)確穩(wěn)定，可用于食品