外源因素對紅松查爾酮合成酶基因表達和多酚含量的影響.pdf

1、紅松中富含有多種生物活性物質，具有重要的科學研究和實際應用價值。近些年來，紅松生物活性相關的研究工作不斷加強，但與活性物質代謝相關的研究還處于起步階段。尤其是紅松中多酚代謝活動相關研究還未完全開展。本課題研究了不同外源因素對紅松代謝活動的影響，采用Folin-酚法測定紅松中多酚含量，利用實時熒光定量PCR技術檢測CHS基因的表達量，使用雙向電泳技術和質譜技術進行蛋白質組學研究。主要取得如下成果：
　　（1）研究了不同外源因素對紅松

2、多酚含量的影響。使用Folin-酚法測定多酚含量。研究發(fā)現(xiàn)：紫外照射時間為4h時，紅松不定芽中多酚含量最，達到39.41mg/g；培養(yǎng)溫度為20℃時，紅松多酚含量最高，達到43.25mg/g，培養(yǎng)溫度為10℃時，多酚含量達最低值21.37mg/g；不同季節(jié)紅松松針多酚含量順序：秋季＞夏季＞冬季＞春季，秋季多酚含量為36.12mg/g，春季多酚含量為24.58mg/g。說明紫外光照、培養(yǎng)溫度和季節(jié)都能對紅松多酚的含量造成影響。
　　

3、（2）研究了不同外源因素對查爾酮合成酶基因表達的影響。采用RT-PCR技術檢測紅松中CHS基因的表達。研究發(fā)現(xiàn)，紫外、溫度和季節(jié)都能影響CHS基因的表達：以紫外照射0h的實驗組為內標，紫外照射2h時，CHS基因的表達量達最高值，為內標的3.87倍，紫外照射8h時，CHS基因的表達量降低至內標的0.16倍；以培養(yǎng)溫度10℃的實驗組為內標，培養(yǎng)溫度為20℃時，CHS基因的表達量最高，為內標的3.10倍；不同季節(jié)紅松松針CHS基因表達量順序為

4、：夏季＞秋季＞冬季＞春季，以春季實驗組為內標，夏季的CHS基因的表達量為內標的3.03倍。通過紅松多酚含量和CHS基因表達量對比研究，發(fā)現(xiàn)基本變化規(guī)律：紅松多酚含量隨CHS基因的表達量升高而增加。
　?。?）研究了不同外源因素對紅松總蛋白表達的影響，通過雙向電泳技術分離鑒定紅松總蛋白。結果表明紫外光照、溫度和季節(jié)對蛋白表達量影響較大，還出現(xiàn)一些蛋白點的極端缺失。從各組中選取差異顯著蛋白點進行MALDI--TOF-MS分析：紫外實驗