葡萄籽原花青素制備工藝及真菌毒素檢測.pdf

1、本文以葡萄籽為原料,研究原花青素的制備工藝及葡萄籽和提取物中真菌毒素的分析測定方法。采用罐組式逆流提取法對葡萄籽進行提取。分別以水和乙醇為提取溶劑,經(jīng)正交實驗得到最佳工藝條件。以水為溶劑時采用整粒葡萄籽,料液比(g:mL)1:3,提取溫度100℃,提取級數(shù)四級,提取時間40min/級;與單罐水提取法相比,動態(tài)罐組式逆流法的提取率略有提高,提取時間減少33％,單位藥材的溶劑消耗量減少75%。以乙醇為溶劑時采用葡萄籽粗粉(20目),55%(

2、v/v)乙醇,料液比(g:mL)1:6,提取溫度75℃,提取級數(shù)3級,提取時間30min/級。與單罐乙醇回流提取法相比,本法提取率基本相同,提取溫度降低11.8%,提取時間縮短25%,單位藥材的溶劑消耗量減少44%。以上研究表明,與常規(guī)提取法相比,罐組式逆流提取法能獲取較高的提取率,同時大大減少提取溶劑用量,縮短提取時間,是一種高效節(jié)能的提取方法。選用AB-8大孔樹脂對葡萄籽提取液進行純化。工藝路線如下:上樣液濃度為8.28 mg mL

3、-1,流速為2BVh-1,上樣6 BV。以4 BV h-1的流速水洗4BV去除大部分非原花青素成分,根據(jù)生產(chǎn)需要可采用兩種洗脫方式:(1)20%乙醇以2BV/h的流速洗脫4 BV,再用40%乙醇以2 BV h-1的流速洗脫4BV,收集洗脫液,減壓濃縮,冷凍干燥。(2)直接用40%乙醇以2 BV h-1的流速洗脫4 BV,收集洗脫液,減壓濃縮,冷凍干燥。樹脂柱清洗,重復使用。應用近紅外透射光譜分析技術(shù),建立葡萄籽提取物大孔樹脂純化過程的定

4、量測定模型,實時監(jiān)測葡萄籽多酚洗脫過程濃度的動態(tài)變化。模型采用偏最小二乘法(PLS),9個主因子,相關(guān)系數(shù)R2達到0.9995,RMSEC為0.713,RSEC為2.39%。與傳統(tǒng)方法(比色法)相比,采用本方法可以在20 s進行一次測定,而比色法需要2 h以上。該方法能快速、無損、有效地測定大孔樹脂洗脫液中多酚的濃度,對生產(chǎn)過程進行質(zhì)量控制。采用13C17-AFB1同位素內(nèi)標,首次建立了同時測定葡萄籽(包括皮和梗)中AFB1、AFB2、

5、MPA和STC的UHPLC-MS法。方法學研究表明,該方法簡便、準確,能在4 min內(nèi)將4種真菌毒素完全分離并準確測定,可用于葡萄籽中AFB1、AFB2、MPA和STC等4種真菌毒素的分析測定。采用13C20-OTA同位素內(nèi)標,建立了測定葡萄籽及其提取物原花青素中OTA的UHPLC-MS法,該方法簡便、準確,可用于葡萄籽及其提取物原花青素中OTA的分析測定。在此基礎(chǔ)上,研究了OTA在葡萄籽提取及大孔樹脂純化過程的轉(zhuǎn)移與殘留,結(jié)果表明,采