氧化三甲胺代謝相關菌的研究.pdf

1、本文用含有TMAO的液體培養(yǎng)基經(jīng)過富集分別從鱈魚的體表和內臟獲得能夠參與TMAO代謝的混合菌群,并通過對混合菌群144h的培養(yǎng),對使用非抑制性離子色譜法對其代謝TMAO能力進行了檢測。結果顯示來自內臟和表皮的混合菌群都能夠利用TMAO,產(chǎn)生大量的NH4+和TMA,但是在內臟和體表混合菌群中TMAO被利用的情況卻并不同。在內臟混合菌的發(fā)酵后期TMAO、NH4+和TMA都處于動態(tài)平衡,而在體表混合菌的發(fā)酵過程中TAMO含量一直下降并完全被利

2、用完畢,TMA含量先上升后下降,NH4+則一直處于上升狀態(tài)。這說明在內臟和體表的混合菌中有著不同的菌種構成,在體表的混合菌中存在著能夠利用TMAO還原產(chǎn)物TMA的細菌,而在內臟混合菌種不存在能夠繼續(xù)代謝TMA的微生物。
　　 對來源于內臟和表皮混合茵群進行分離純化,共得到14株菌,通過對它們代謝TMAO的能力進行檢測,分析了它們在參與TMAO代謝過程中可能的途徑。對分離的到的14株菌株中能夠代謝TMAO的5株細菌進行了16SrD

3、NA的分析鑒定,對于經(jīng)過反復培養(yǎng)分別得到兩株能夠穩(wěn)定代謝TMAO的菌株,NZ-2和BP-1-1,再經(jīng)過Biolog微孔鑒定,最終確定這兩株菌分別是Stenotrophomonasmaltophilia(嗜麥芽糖寡氧單胞菌)和Providencia rettgeri(雷士普羅威登斯菌),在目前國內外能夠代謝TMAO的細菌的文獻中尚未出現(xiàn),說明它們可能是新種。
　　 通過對能夠代謝TMAO的兩株細菌BP-1-1和NZ-2對TMAO的

4、利用情況進行研究,發(fā)現(xiàn)BP-1-1和NZ-2均不能利用TMAO作為唯一碳源和氮源,這與目前的報道相一致。TMAO可能是這兩株菌呼吸產(chǎn)能過程中的電子傳遞的最終受體,并將其還原為TMA,對TMAO的還原產(chǎn)物TMA不能繼續(xù)代謝產(chǎn)生甲醛或者其他含氮物質。
　　 通過在有氧和厭氧條件下對BP-1-1和NZ-2進行培養(yǎng),并對其發(fā)酵液中TMAO及其代謝產(chǎn)物的檢測,發(fā)現(xiàn)BP-1-1和NZ-2在生長過程中對TMAO的還原并不受氧氣的抑制,而有氧條

5、件下比在厭氧條件下對TMAO還原程度更大,這說明在這兩株細菌中所存在的TMAO還原酶與先前報道的大腸桿菌等細菌中的TMAO還原酶可能不同,在有氧存在時具有更高的活性,并且可能存在著與大腸桿菌以細胞色素為中間介質的電子傳遞過程不同的電子轉移方式。
　　 本文通過分析24h內BP-1-1和NZ-2在有氧和厭氧條件下對TMAO的利用情況和細菌的生長情況,確定TMAO還原所發(fā)生的階段是在BP-1-1和NZ-2的生長對數(shù)期,這與目前報道是

6、一致的。
　　 此外,通過在新鮮鱈魚肉中分別加入適當濃度的BP-1-1和NZ-2菌懸液,置于冷藏溫度和室溫下恒溫恒濕培養(yǎng),并用加入對應體積的無菌生理鹽水的新鮮鱈魚肉作空白對照,通過感官觀察發(fā)現(xiàn),在室溫條件下加入BP-1-1和NZ-2菌懸液的鱈魚肉細菌大量繁殖,并且迅速導致魚肉的腐敗。
　　 將魚肉中TMAO及其代謝產(chǎn)物的檢測結果與空白對照進行對比,發(fā)現(xiàn)魚肉在細菌侵染的情況下,其中的TMAO迅速被還原為TMA,而且魚肉中的