玉米麩皮阿魏酸糖酯對H2O2誘導(dǎo)的mIMCD3細(xì)胞衰老的影響.pdf

1、S t u d y o n t h e E f f e c t so f F e r u l i c A c i dS u g a r E s t e r ：f r q C—H ，O E s t e r sf r o m o r n B r a n o n H ，． a r C ， ，．i n d u c e d C e l lS e n e s c e n c e o nm I M C D 3T h e s i ss u b m i

2、t t e d t oQ i n g d a o A g r i c u l m r a l U n i v e r s i t yI n F u l f i l l m e n t o f t h e R e q u i r e m e n tf o r t h eD e g r e e o fM a s t e r o f E n g i n e e r i n gZ h a n g J i n l i n g( D e p a r

3、 t m e n t o f F o o d S c i e n c ea n d T e c h n o l o g y )S u p e r v i s o r ：G e n g X i nQ i n g d a o ．C h i n aJ u n e ，2 0 1 4青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 摘要玉米麩皮阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導(dǎo)的m I M C D 3細(xì)胞衰老的影響摘要玉米麩皮是阿魏酸含量最高的植物細(xì)胞壁材料，其中的阿魏酸

4、以酯鍵方式與低聚糖結(jié)合構(gòu)成阿魏酸糖醅。阿魏酸糖酯已被證實(shí)具有多種生理活性，我們前期動物試驗(yàn)結(jié)果表明玉米麩皮阿魏酸糖酯具有抗衰老作用，但涉及的機(jī)制尚未有報道。本研究的主要目的是通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究玉米麩皮阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導(dǎo)的I T l I M C D 3 細(xì)胞衰老的影響及其對衰老相關(guān)K l o t h o 基因及蛋白表達(dá)水平的影響，探討阿魏酸糖酯抗衰老機(jī)制。苯次實(shí)驗(yàn)首先建m I M C D 3 胞的衰老模型，以5 0 “m

5、o l ／L 的H 2 0 2 刺激細(xì)胞，設(shè)立不同作用時間點(diǎn)，通過檢測細(xì)胞衰老、凋亡、氧化指標(biāo)建立起衰老模型；然后通過M T T法測定阿魏酸糖酯毒性，確定其作用于細(xì)胞的劑量：最后在前兩步實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上加入阿魏酸糖酯溶液研究不同分子量不同劑量的阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導(dǎo)的m I M C D 3 細(xì)胞衰老及固D t h o 基因、蛋白袁達(dá)水平的影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1 ．H 2 0 2 誘導(dǎo)的m l M C D 3 細(xì)胞衰老模型的建立5

6、0 p m o l ／L 的H 2 0 2 刺激螄M C D 3 細(xì)胞7 d 后，細(xì)胞內(nèi)衰老相關(guān)半乳糖苷酶染色陽性率達(dá)到了9 0 ％以上，細(xì)胞周期被不可逆地阻滯在G 1 期細(xì)胞比例增加，H o e c h s t 一3 3 3 4 2 染色法觀察細(xì)胞內(nèi)染色均勻無濃密致染的熒光，流式細(xì)胞儀檢測無凋亡峰出現(xiàn)，- 蘭田J j 包S O D 活力降低，M D A 含量升高。以上結(jié)果說明，5 0 “m o U LH 2 0 2 誘導(dǎo)m l M C

7、 D 3 細(xì)) 1 9 7 d ，細(xì)胞進(jìn)入衰老狀態(tài)，且未發(fā)生凋亡現(xiàn)象，對細(xì)胞造成了一定程度的氧化損傷，衰老模型成功建立。2 ．玉米麩皮阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導(dǎo)的m I M C D 3 細(xì)胞衰老7 L K l o t h o 基因、蛋白袁達(dá)水平的影響首先通過M T T 法確定阿魏酸糖酯的加樣量，分別采g z 5 0 p g ／r n L 、1 0 0 “g ／m L 、2 0 0 p g ／m L作為為低劑量、中劑量和高劑量濃度。

8、通過對培養(yǎng)完畢的細(xì)胞檢測發(fā)現(xiàn)，阿魏酸糖酯實(shí)驗(yàn)組可抑* , I l l 2 0 2 對細(xì)胞造成的氧化損傷及衰老影響，主要表現(xiàn)有：細(xì)胞內(nèi)半乳糖苷酶活性降低，G 】期比例細(xì)胞降低，S 期細(xì)胞比例升高，細(xì)胞S O D 活力升高，M D A 含量降低。通過R T - P C R 和W e s t e r nB l o t 檢測發(fā)現(xiàn)，大部分阿魏酸糖酯組可顯著提高K l o t h o 基因及蛋白表達(dá)水平，說明阿魏酸糖酯可能通過直接上調(diào)K l o t