甲基阿魏酸對乙醇誘導(dǎo)的人肝細(xì)胞氧化損傷的作用研究.pdf

1、目的：
　　建立乙醇誘導(dǎo)的人肝細(xì)胞損傷模型，研究蟬翼藤提取物甲基阿魏酸（MFA）抗肝細(xì)胞氧化損傷的作用及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)L-02細(xì)胞，MTT法篩選 MFA、乙醇的最適作用濃度及乙醇的最適作用時(shí)間。采用5％乙醇誘導(dǎo)L-02細(xì)胞12h建立人肝細(xì)胞氧化損傷細(xì)胞模型。將細(xì)胞分為5組：正常對照組（完全培養(yǎng)基）；模型組（含5%乙醇完全培養(yǎng)液）；陽性藥物組（含VC15mg/mL+5%乙醇誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基）；MF

2、A低劑量組（含MFA10mg/mL+5%乙醇誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基）；MFA高劑量組（含MFA20mg/mL+5%乙醇誘導(dǎo)完全培養(yǎng)基）。流式細(xì)胞儀檢測L-02細(xì)胞凋亡情況，熒光探針法檢測L-02細(xì)胞內(nèi)ROS的含量，酶活法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）含量，分光光度法檢測細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-px）、過氧化氫酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）含量，PCR法檢測各組細(xì)胞中Bax mRNA的表達(dá)水平

3、，Western Bloting檢測Bax蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　與對照組比較模型組乙醇能促進(jìn)L-02細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)細(xì)胞氧化應(yīng)激水平，降低細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-px水平，同時(shí)升高細(xì)胞上清液中ALT、AST水平，增加Bax mRNA以及Bax蛋白的表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。MFA干預(yù)后，增高了細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT和GSH-px的活性，降低了細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ALT、AST水平，抑制Bax mRN