阿魏酸對UVA致人成纖維細胞光老化的抑制作用研究.pdf

1、背景和目的:
　　皮膚衰老包括內源性自然衰老和受環(huán)境因素影響的外源性衰老，后者主要是由于紫外線輻射所致稱光老化。長波紫外線(UVA，320～400nm)是產(chǎn)生皮膚光老化的主要因素。UVA主要作用于真皮中的成纖維細胞。光老化時皮膚組織結構、含水量、光滑度、彈性和順應性均下降。組織學表現(xiàn)為表皮有厚度變化如萎縮或增生，并伴有真皮細胞及基質的改變。皮膚的老化影響美觀，引起患者生活質量的下降，隨著環(huán)境污染的日益加重，如何預防和延緩皮膚老化是

2、關注和研究的熱點。
　　研究發(fā)現(xiàn)，轉化生長因子(TGF)-β是一大類多功能的細胞生長增殖調節(jié)蛋白，對細胞的生長、分化和免疫功能都有重要的調節(jié)作用，其中TGF-β1可刺激成纖維細胞增殖，促進細胞外基質(ECM)如膠原蛋白的表達和抑制ECM的降解?；|金屬蛋白酶-1(MMP-1)可以降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和X型結締組織膠原，導致膠原變性，破壞ECM的正常結構和生理功能。金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)是MMPs的主要內源性抑制物，其中TIMP

3、-1與活化的MMP-1非共價結合抑制MMP-1的活性。此外，p66Shc是調控細胞應激反應和ROS產(chǎn)生的重要基因，參與了氧化應激和細胞衰老相關信號通路。故TGF-β1、MMP-1、TIMP-1、p66Shc在皮膚光老化的發(fā)生和發(fā)展過程中都起著重要作用。
　　由于藥效明確及較少的副作用，從天然植物和傳統(tǒng)藥物中提取的新型防光藥物受到越來越多的重視。阿魏酸(Ferulic Acid)存在于川芎、當歸等活血化瘀中藥材中。阿魏酸具有抗血栓形

4、成、消炎止痛及很強的抗氧化、清除自由基以及細胞保護作用。既往我們已對阿魏酸的抗紫外線作用進行了初步研究，發(fā)現(xiàn)它能夠有效抑制長波紫外線(UVA，320～400nm)和中波紫外線(UVB，290～320nm)對人皮膚細胞（包括角質形成細胞和成纖維細胞）的氧化損傷，提高細胞氧化防御能力。然而，阿魏酸是否也可以減輕UVA輻射所引起的光老化？故我們在本研究中采用UVA輻射以及阿魏酸預孵育作用于人皮膚成纖維細胞，觀察UVA致細胞老化效應和阿魏酸干預

5、對此過程的影響，以探討其作用機制。
　　方法:
　　分離培養(yǎng)人原代成纖維細胞，分為空白組、阿魏酸組、UVA組和UVA+阿魏酸組。以UVA照射細胞，照光劑量為10J/cm2，其中藥物干預組于照光前后加入200μg/mL阿魏酸孵育。照光后于不同時間段收集細胞進行檢測。
　　1.組織化學染色法檢測衰老相關β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase，SA-β-Gal)表達。

6、　　2.酶聯(lián)免疫吸附法檢測上清液中轉化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)含量。
　　3.實時定量PCR(real-time PCR)法檢測基質金屬蛋白酶-1(matrixmetalloproteinase-1，MMP-1)、金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1，TIMP-1)和p66shcmRNA表達水平變化

7、。
　　結果:
　　1.正常細胞組及單純阿魏酸組β-半乳糖苷酶陽性細胞均較低，UVA組β-半乳糖苷酶陽性細胞數(shù)則顯著升高，加入阿魏酸處理可使β-半乳糖苷酶陽性細胞比率明顯降低。
　　2.單純阿魏酸處理可以促進TGF-β1分泌;UVA照射使TGF-β1分泌量明顯降低，加入阿魏酸干預可增加TGF-β1分泌量。
　　3.UVA能夠誘導MMP-1、TIMP-1和p66ShcmRNA表達水平升高，而阿魏酸可在一定程度上抑制