抗對硫磷基因工程四價抗體在大腸菌中的高效表達.pdf

1、1、抗對硫磷四價抗體表達載體構(gòu)建
　　 根據(jù)抗對硫磷四價抗體基因序列設(shè)計對應(yīng)對引物,用經(jīng)優(yōu)化后的PCR反應(yīng)條件擴增得到抗對硫磷四價抗體基因后經(jīng)酶切、PCR擴增初步驗證及基因測序確認為目的基因后,將其與達載體pTO-T7連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌rigami2(DE3),成功構(gòu)建抗對硫磷四價抗體表達載體。
　　 2、抗對硫磷四價抗體的表達及檢測
　　 抗對硫磷四價抗體表達載體經(jīng)IPTG誘導(dǎo)目的基因表達,表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-P

2、AGE檢測蛋白分子量和Western Blot特異性鑒定,結(jié)果表明,雖然表達產(chǎn)物中仍有包涵體,但與抗體改造前相比,可溶性蛋白含量已得到顯著提高,經(jīng)濃度測定得知目的蛋白濃度為0.29 mg／ml。
　　 3、抗對硫磷四價抗體的ELISA反應(yīng)活性檢測
　　 改造后的基因工程抗體經(jīng)純化后用ELISA方法測定生物學(xué)活性,并與實驗室保存的單克隆抗體、單鏈抗體、前期制備的四價抗體相比較,ELISA結(jié)果顯示該抗體與對硫磷特異結(jié)合呈陽性