草莓高效再生體系的建立和抗除草劑Bar基因工程菌的構(gòu)建.pdf

1、本試驗以適合安徽省栽培的草莓(Fragaria ananassa Duch)優(yōu)良品種——豐香、鬼怒甘和章姬為試材，通過對莖尖增殖、葉片愈傷組織誘導(dǎo)、生根培養(yǎng)、移栽基質(zhì)的篩選研究，建立起草莓簡單、快速、高效的莖尖離體再生體系，為草莓轉(zhuǎn)基因研究提供基礎(chǔ)。再者，利用以LBA4404(pAL4404)、HB101 (pRK2013)、DH5a(pBI121-bar)進(jìn)行三親雜交，為bar基因轉(zhuǎn)化提供工程菌。另外，對草莓bar基因轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌侵染體

2、系作了初步探索。 試驗研究獲得的主要結(jié)果如下： 1、草莓莖尖消毒不同處理的效果存在顯著差異。其中，處理Ⅳ效果最好，成活率達(dá)到90％，與其他處理的差異達(dá)到了極顯著水平。 2、在莖尖培養(yǎng)中，當(dāng)外植體大小>0.7 mm時，成活率高達(dá)95.6％，外植體<0.3mm時成活率不到20％；外植體大小為0.3～0.5 mm、0.5～0.7 mm時，成活率分別達(dá)到了80％、84％。 3、豐香、鬼怒甘及章姬的最佳增殖培養(yǎng)基分

3、別為：MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.10mg/L、MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.10 mG/L、MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.20 mg/L。說明不同基因型的品種最佳增殖培養(yǎng)基存在差異。 4、應(yīng)用SPSS軟件分析，得出誘導(dǎo)葉片愈傷組織的最佳培養(yǎng)基是：MS+BA 3.0mg/L+2，4-D 0.2 mg/L+IBA 0.3 mg/L。 5、豐香、鬼怒甘、章姬生根的最適培養(yǎng)基分別為是：1/

4、2MS+IBA 0.1 mg/L、1/2MS+IBA 0.0 mg/L、1/2MS+IBA 0.2 mg/L。 6、分步煉苗后移栽，發(fā)酵過的稻殼+菜園土(1:1)，成活率達(dá)到98％左右；其它配方成活率也到達(dá)了90％左右。 7、利用三親雜交法將真核表達(dá)載體pBI121-bar轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404，通過菌落PCR、質(zhì)粒PCR、質(zhì)粒雙酶切電泳檢測，證明工程菌構(gòu)建成功。 8、試驗篩選出濃度為25 mg/L和20