二溴海因在羅非魚體內(nèi)殘留及其毒理效應(yīng)研究.pdf

1、二溴海因（1，3-dibromo-5，5-dimethylhydantoin，DBDMH）是一種新型殺菌消毒劑，在防治水產(chǎn)動(dòng)物疾病中有很好的殺菌效果，目前在水產(chǎn)養(yǎng)殖中被廣泛應(yīng)用，被認(rèn)為是最有前景的消毒劑。但藥物在殺滅水體中有害病菌的同時(shí)可能在水生生物體內(nèi)殘留，進(jìn)而對(duì)養(yǎng)殖對(duì)象的組織器官產(chǎn)生不同程度的毒副作用。鑒于此，本文以吉富羅非魚為研究對(duì)象，設(shè)置不同劑量的二溴海因?qū)ζ溥M(jìn)行亞急性毒性試驗(yàn)，研究二溴海因在羅非魚體內(nèi)的動(dòng)態(tài)消除規(guī)律，檢測(cè)亞急性

2、毒性試驗(yàn)中二溴海因?qū)Ω我扰K的抗氧化酶活性的影響，并對(duì)其肝胰臟進(jìn)行組織切片觀察，此外，還研究其對(duì)肝胰臟DNA的損傷情況，以此探討二溴海因?qū)涣_非魚的毒理效應(yīng)。研究結(jié)果如下:
　　(1)二溴海因在羅非魚體中的殘留及其消解研究
　　建立了以離子色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中溴離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)的方法，并用該方法檢測(cè)了二溴海因作用于吉富羅非魚后所產(chǎn)生的溴離子在肌肉中殘留及消解的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。檢測(cè)時(shí)采用Cs12A陰離子柱分離，電導(dǎo)檢測(cè)，溴離子濃度為10～

3、200 mg/kg，相關(guān)系數(shù)r2=0.9963。檢測(cè)結(jié)果表明，1）不同添加水平下，該方法的回收率為82.58％～86.14％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.61％～6.54％。因此，該方法可以應(yīng)用于水產(chǎn)品中溴離子的定量分析;2）二溴海因濃度為0～0.3 mg/L時(shí)，肌肉中未檢出溴離子;二溴海因濃度為1.5 mg/L時(shí)，暴露前4d羅非魚肌肉中溴離子的積累在同一水平，4～16 d肌肉中溴離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)呈時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，隨時(shí)間的延長(zhǎng)溴離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加，第1

4、6d時(shí)溴離子在肌肉中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)最大值21.6 mg/kg，符合國(guó)際食品法典的規(guī)定。在清水中恢復(fù)10d后，肌肉中溴離子的質(zhì)量分?jǐn)?shù)降低?？梢姡瑢?shí)際生產(chǎn)中若二溴海因的施藥劑量為0.3～0.4 mg/L，則肌肉中溴離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)人類幾乎沒有威脅。
　　(2)二溴海因?qū)α_非魚肝胰臟抗氧化系統(tǒng)的影響
　　采用半靜態(tài)水質(zhì)接觸染毒法，研究不同濃度(0、0.06、0.3、1.5 mg/L)、不同時(shí)間(1、2、4、8、16、26d)二溴海因?qū)?/p>

5、吉富羅非魚肝胰臟總還原性谷胱甘肽(T-GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽還原酶(GR)及谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)的影響。結(jié)果表明:肝胰臟SOD、CAT、GPx和GSH/GSSG在0.06 mg/L、0.3 mg/L、1.5 mg/L三個(gè)二溴海因暴露濃度下，隨著暴露時(shí)間的延長(zhǎng)表現(xiàn)為先被誘導(dǎo)后被抑制的變化趨勢(shì);肝胰臟GR、GST和T-GSH在0.

6、06 mg/L、0.3 mg/L、1.5 mg/L三個(gè)二溴海因暴露濃度下均被抑制。恢復(fù)試驗(yàn)結(jié)果表明持續(xù)給藥0.06～1.5 mg/L二溴海因會(huì)對(duì)吉富羅非魚造成不可逆損傷，且隨二溴海因濃度增加，不可逆損傷加重。但實(shí)際生產(chǎn)中使用的二溴海因短時(shí)間內(nèi)基本降解，所以損傷不大。
　　(3)二溴海因?qū)α_非魚肝胰臟組織結(jié)構(gòu)變化的影響
　　采用H-E染色法對(duì)亞急性毒性試驗(yàn)的肝胰臟樣本進(jìn)行石蠟切片觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn):三個(gè)濃度暴露下羅非魚肝胰臟組織損

7、傷隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng)而加重，并且肝胰臟組織損傷隨二溴海因濃度的升高而增強(qiáng)，高濃度組對(duì)肝胰臟組織的損傷毒性作用明顯高于低濃度組。損傷后主要表現(xiàn)為肝細(xì)胞腫脹、肝細(xì)胞水樣變、肝細(xì)胞脂肪變、肝血竇淤血、肝中央靜脈淤血等病狀。恢復(fù)試驗(yàn)中各濃度組羅非魚肝胰臟組織結(jié)構(gòu)損傷都有所恢復(fù)，表明0.06 mg/L～1.5 mg/L二溴海因在短時(shí)間內(nèi)(16d)對(duì)羅非魚肝胰臟組織結(jié)構(gòu)造成可逆性損傷。實(shí)際生產(chǎn)中使用的二溴海因短時(shí)間內(nèi)基本降解，所以損傷不大。
　

8、　(4)二溴海因?qū)α_非魚肝胰臟DNA損傷的影響
　　二溴海因暴露第4天、8天、16天，采取羅非魚肝胰臟組織，利用單細(xì)胞凝膠電泳技術(shù)立即測(cè)定二溴海因?qū)Ω我扰K的DNA損傷指標(biāo)-尾部DNA量(TDNA％)、尾長(zhǎng)(TL)、尾矩(TM)、Olive尾矩(OTM)。結(jié)果顯示，肝胰臟DNA損傷程度隨著暴露時(shí)間的增加逐漸加劇，在暴露第16天，DNA損傷最為嚴(yán)重。暴露短期內(nèi)，與對(duì)照組相比，各劑量組DNA損傷差異不顯著(P＞0.05)，暴露中期，低劑