超高壓處理對米渣蛋白水解物抗氧化活性的影響.pdf

1、米渣蛋白是稻米深加工的主要副產(chǎn)物，其水解肽是優(yōu)質(zhì)天然的抗氧化劑，原料來源容易、成本低、無過敏反應(yīng)、消費(fèi)者容易接受。米渣蛋白國內(nèi)外目前主要是干燥后用作動物飼料，或者只進(jìn)行了部分未確定的酶法改性，工業(yè)附加值極低。本項(xiàng)目利用米渣蛋白生產(chǎn)米渣蛋白抗氧化肽，彌補(bǔ)了國內(nèi)功能性米渣肽產(chǎn)品空白，以此為基料開發(fā)嬰兒配方產(chǎn)品、保健或功能性食品配料、普通食品配料和化妝品，對提高米渣綜合利用水平、實(shí)現(xiàn)多次轉(zhuǎn)化增值具有重要意義。
　　本文采用堿溶酸提法提取

2、米渣蛋白，以米渣蛋白的提取率為指標(biāo)，對米渣蛋白堿法提取的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化研究:對米渣及米渣蛋白的成分分析可知，米渣提取出來的蛋白含量為83.67％，相對原料米渣的52.56％來說，蛋白含量提高了很多;通過實(shí)驗(yàn)確定米渣蛋白的等電點(diǎn)為5.4;采用單因素試驗(yàn)與響應(yīng)面試驗(yàn)相結(jié)合的方式，確定米渣蛋白堿法提取的最佳工藝條件為:米渣粉碎粒度80目，料液比1∶10，提取溫度44.5℃，提取時間3h，pH為12.35，驗(yàn)證結(jié)果顯示，在該條件下，米渣蛋白

3、的提取率達(dá)69.68％左右。
　　采用多種蛋白酶對米渣蛋白進(jìn)行酶解，以水解度為指標(biāo)，最終選擇以中性蛋白酶作為酶解得實(shí)驗(yàn)酶源，采用單因素試驗(yàn)與響應(yīng)面試驗(yàn)相結(jié)合的方式，以ABTS自由基清除率為指標(biāo)，對米渣蛋白酶解的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化研究，確定米渣蛋白酶解的最佳工藝條件為:[E]/[S]為1.88％，酶解時間為3.9h，酶解溫度為40.16℃，[S]為2％，在該條件下驗(yàn)證，米渣蛋白的酶解物對ABTS自由基清除率達(dá)72.68％左右。

4、>　　設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對米渣蛋白進(jìn)行不同壓力和時間的超高壓處理后，測定其酶解液的抗氧化活性，三項(xiàng)自由基清除率指標(biāo)均顯示在400MPa下處理10min后，酶解液的抗氧化活性表現(xiàn)最佳，同時測定超高壓前后在酶解過程中水解度的變化，結(jié)果顯示超高壓能夠加強(qiáng)酶解強(qiáng)度、加快酶解進(jìn)程，使米渣蛋白酶解得更徹底。
　　為了探討超高壓對米渣蛋白酶解液抗氧化活性增強(qiáng)的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步通過SDS-PAGE凝膠電泳實(shí)驗(yàn)、激光粒徑分布分析實(shí)驗(yàn)、傅立葉近紅外光譜檢測實(shí)

5、驗(yàn)、氨基酸種類與含量分析實(shí)驗(yàn)、酶解液多肽分子量分布分析實(shí)驗(yàn)進(jìn)行初步機(jī)制探究;電泳實(shí)驗(yàn)表明超高壓使米渣蛋白的亞基發(fā)生了部分解離現(xiàn)象，但是并沒有改變米渣蛋白的一級結(jié)構(gòu);激光粒徑分布分析結(jié)果顯示超高壓會大大的減小米渣蛋白溶液的平均粒徑，使酶解過程中酶與底物更徹底的結(jié)合反應(yīng);而通過傅立葉近紅外掃描結(jié)果可知，超高壓處理后蛋白質(zhì)的降解加劇，整個溶液中蛋白質(zhì)分子的離子化程度加強(qiáng)，分子上的電荷分布增加，蛋白質(zhì)裸露出更多的親水基團(tuán)，促進(jìn)酶解反應(yīng)的進(jìn)行;對

6、超高壓前后的樣品進(jìn)行氨基酸種類和含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)超高壓并沒有改變氨基酸種類結(jié)構(gòu)，但是對其含量有一定程度的影響，主要是在一些具有抗氧化性氨基酸的含量方面有一些提高，這也導(dǎo)致米渣蛋白酶解液抗氧化活性的變化;在對酶解液進(jìn)行相對分子量分布分析后發(fā)現(xiàn)，超高壓會將一些大分子的肽水解成更多的小分子肽，而大量已知的的研究表明小分子的肽是主要的抗氧化功能物質(zhì)。
　　基于上述實(shí)驗(yàn)，對超高壓處理米渣蛋白，并對其酶解液抗氧化活性的提高進(jìn)行了初步的探究，