草魚魚鱗膠原蛋白提取分離工藝的研究.pdf

1、膠原蛋白(collagen)是一種白色、不透明、無(wú)支鏈的纖維蛋白質(zhì)。分子量為30萬(wàn)道爾頓。膠原蛋白是人體留住鈣質(zhì)的主要成分之一,對(duì)人體的生長(zhǎng)、發(fā)育具有極其重要的作用。魚鱗含有豐富的膠原蛋白,可作為膠原蛋白提取的原料。以草魚魚鱗為材料,對(duì)膠原白蛋提取工藝進(jìn)行考察、摸索,并對(duì)提取結(jié)果進(jìn)行分析。
　　魚鱗的主要成分有水分、灰分、粗蛋白、少量的鳥嘌呤和卵磷脂。對(duì)魚鱗進(jìn)行主要成分測(cè)定,可得到其中水分、灰分、粗蛋白的含量分別為14.08％、2

2、5.58%、58.32%;粗蛋白中的膠原蛋白占魚鱗的含量為51.24%。
　　脫鈣工藝:以單因素設(shè)計(jì)分析得出最優(yōu)脫鈣方式。具體脫鈣參數(shù)為:EDTA濃度0.5mol/L、脫鈣時(shí)間24h、料液比1:50、脫鈣溫度25℃,脫鈣兩次。超聲波輔助脫鈣的結(jié)果表明,超聲波輔助脫鈣的效果并不明顯。
　　除雜蛋白工藝:分析除雜單因素試驗(yàn)的結(jié)果,得出具體的除雜參數(shù)為:料液比1:40、碳酸鈉溶液濃度0.3mol/L、脫雜時(shí)間6h、脫雜溫度20℃,

3、除雜三次。超聲波輔助除雜對(duì)于除雜效果有一定幫助,在超聲波頻率為60Hz時(shí)除雜效果較好。
　　酸溶性膠原蛋白(Acid-solublecollagens)提取工藝:以經(jīng)過(guò)前處理過(guò)程的草魚魚鱗為原料,以醋酸濃度、提取時(shí)間和提取溫度作為影響因子,進(jìn)行單因素提取研究;為了更準(zhǔn)確的分析各個(gè)因素的相互交互影響,采用響應(yīng)面法分析了醋酸濃度(A)、提取時(shí)間(B)和提取溫度(C)對(duì)ASC提取率的影響,方差分析表明,對(duì)提取影響最顯著的是溫度(C),其

4、次是提取時(shí)間(B)和醋酸濃度(A)。提取的最佳工藝條件為:乙酸濃度0.98mol/L、提取時(shí)間24.68h、提取溫度28℃。在此條件下,ASC提取率預(yù)測(cè)值為15.47%。由于考慮實(shí)際操作的可行性和方便性,取乙酸濃度1mol/L、提取時(shí)間25h、提取溫度28℃作為實(shí)際操作工藝條件。此后進(jìn)行的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明,該最佳工藝條件下提取的可重復(fù)性較好,結(jié)果穩(wěn)定可靠。
　　酶溶性膠原蛋白(Pepsin-solublecollagens)提取工

5、藝:以經(jīng)過(guò)前處理過(guò)程的草魚魚鱗為原料,以料液比、提取溫度、提取時(shí)間和加酶量作為影響因子,進(jìn)行單因素提取研究;為了更準(zhǔn)確的分析各個(gè)因素的相互交互影響,采用響應(yīng)面法分析了料液比(A)、提取溫度(B)、提取時(shí)間(C)和加酶量(D)對(duì)PSC提取率的影響,方差分析表明,對(duì)提取率影響顯著的是料液比(A),其次是提取溫度(B)、加酶量(D)和提取時(shí)間(C)。提取的最佳工藝條件為:料液比1:77、溫度25℃、時(shí)間24h、加酶量2.53%。在此條件下,P

6、SC提取率預(yù)測(cè)值為24.04%。由于考慮實(shí)際操作的可行性和方便性,取料液比1:77、提取時(shí)間24h、提取溫度25℃,加酶量2.5%作為實(shí)際操作。此后進(jìn)行的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明,該最佳工藝條件下提取的可重復(fù)性較好,結(jié)果穩(wěn)定可靠。
　　對(duì)ASC和PSC的粗提物進(jìn)行純化,純化后的ASC和PSC純度分別為94.1%和90.8%。膠原蛋白氨基酸分析結(jié)果為:ASC和PSC水解液中的游離氨基酸總量分別為98.80%和92.06%,兩者羥脯氨酸含量分