柑橘果實感染腳腐病前后揮發(fā)性成份和類黃酮的變化的研究.pdf

1、寄生疫霉（Phytophthora parasitica）是一種危害嚴重柑橘葉片和果實的植物病原菌，寄主范圍廣泛，該真菌也是引起柑橘腳腐病的主要致病因子。高溫高濕是發(fā)病的主導因素之一。根據(jù)前期黃景龍柑橘資源抗病性的鑒定試驗發(fā)現(xiàn)酸橙類、香橙類、枳類和黎檬類多為抗病資源，甜橙類、巴柑檬類、枸櫞類等為感病資源。為探究柑橘資源的抗病機制，有必要對柑橘感染該菌前后揮發(fā)物質(zhì)和類黃酮等次生代謝物的變化進行深入研究。本文選取了5個品種柑橘（椪柑、臍橙、

2、夏橙、香櫞和紅藜檬），基于項空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(HS-SPME-GC-MS)和超高效液相色譜(UPLC)技術(shù)，分析了寄生疫霉病菌感染5個柑橘品種果實染病后不同部位揮發(fā)性物質(zhì)和類黃酮的組成的含量和差異。主要的研究結(jié)果如下:
　　1.柑橘揮發(fā)性物質(zhì)萃取條件的優(yōu)化
　　采用單因素優(yōu)化了HS-SPME技術(shù)萃取柑橘果肉揮發(fā)性物質(zhì)的條件:在果肉樣品中加入1.0g NaCl，達到鹽不飽和環(huán)境;密封樣品瓶恒溫50℃下孵化，熱平

3、衡25min;活化好的SPME萃取纖維頭插入，萃取40min;最后萃取纖維頭在GC進樣口解析5min，果肉中揮發(fā)性風味成分能達到最好的萃取效果。果皮的優(yōu)化條件為:在果肉樣品中加入1.0 g NaCl，達到鹽不飽和環(huán)境;密封樣品瓶恒溫50℃下孵化，熱平衡20min;活化好的SPME萃取纖維頭插入，萃取50min;最后萃取纖維頭在GC進樣口解析5min，果皮中揮發(fā)性風味成分能達到最好的萃取效果。
　　2.柑橘中主要揮發(fā)性物質(zhì)的定性和半

4、定量
　　利用NIST2008和Flavour2.0圖譜庫，結(jié)合化合物的保留指數(shù)，對各種揮發(fā)性物質(zhì)進行定性。柑橘屬植物中揮發(fā)物質(zhì)主要由萜烯類、醇類、醛類、酯類、酮類、芳香烴類及其它物質(zhì)組成，其中主要成分有D-檸檬烯、芳樟醇、γ-萜品烯、石竹烯、橙花醛和檸檬醛等。
　　3.5個柑橘品種染病前后果肉揮發(fā)性物質(zhì)的比較
　　5個柑橘品種的健康果肉共檢測出了106種揮發(fā)性物質(zhì)，其中紅肉臍橙、沿溪晚蘆椪柑、香櫞、夏橙和紅藜檬分別檢

5、出了34、34、38、59和44種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量分別為2586.17μgg-1、2690.49μg g-1、2442.32μg g-1、599.27μg g-1和716.26μg g-1。柑橘果肉中含量最豐富的是萜烯烴類成分，相對含量達到了85％以上，D-檸檬烯是其中含量最多的成分。其次是醇類和醛類物質(zhì)。不同品種果肉揮發(fā)物質(zhì)組成各具特點，物質(zhì)組成存在一定差異。
　　5個柑橘品種的損傷果肉共檢測出了147種揮發(fā)性物質(zhì)，其中紅肉臍

6、橙、沿溪晚蘆椪柑、香櫞、夏橙和紅藜檬別檢出了55、61、65、69和57種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量分別為1777.51μgg-1、2596.64μg g-1、2389.02μg g-1、487.59μg g-1和575.14μg g-1。柑橘經(jīng)過損傷后，果肉中揮發(fā)性成分發(fā)生了一定的變化，但變化規(guī)律在不同品種間表現(xiàn)出一定的差異。含量最多的萜烯烴類成分相對含量95％以上，D-檸檬烯是其中含量最多的成分。與其它品種相比，香櫞果肉中含有更豐富的芳香烴

7、類化合物，其代表性物質(zhì)為1，6-辛二烯-3-醇，3，7-二甲基-，2-氨基苯甲酸等。
　　5個柑橘品種感染腳腐病菌后，果肉共檢測出了147種揮發(fā)性物質(zhì)，其中紅肉臍橙、沿溪晚蘆椪柑、香櫞、夏橙和紅藜檬別檢出了65、64、57、84和64種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量分別為1283.27μg g-1、1384.27μgg-1、752.32μgg-1、402.56μ gg-1和507.54μgg-1。柑橘染病后揮發(fā)性物質(zhì)含量在各個品種中分別減少了

8、27.81％，46.69％，68.51％，17.44％和11.75％，其中香櫞變化最顯著，檸檬最不顯著。揮發(fā)性組分中變化最明顯的是萜烯類中的D-檸檬烯。在各個品種中占到了減少的比例分別為156％，93％，48％，179％和236％。
　　4.5個柑橘品種染病前后果皮揮發(fā)性物質(zhì)的比較
　　5個柑橘品種的健康果皮共檢測出了135種揮發(fā)性物質(zhì)，較果肉豐富，其中紅肉臍橙、沿溪晚蘆椪柑、香櫞、夏橙和紅藜檬分別檢出了73、63、54、4

9、7和49種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量分別為3275.82μg g-1、7302.25μg g-1、14111.10μg g-1、1852.33μg g-1和2040.02μg g-1。與其它品種相比，香櫞果皮中含有更豐富的芳香族化合物，其代表性成分為2-氨基苯甲酸-3，7-二甲基-1，6-辛二烯-3-醇酯。
　　5個柑橘品種的損傷果皮共檢測出了143種揮發(fā)性物質(zhì)，其中紅肉臍橙、沿溪晚蘆椪柑、香櫞、夏橙和紅藜檬別檢出了103、76、57、7

10、6和76種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量分別為2721.531μgg-1、6715.52μg g-1、13679.77μg g-1、1528.69μg g-1和1748.2μg g-1。柑橘損傷后，果皮中揮發(fā)性成分含量較無損傷組都有所下降。含量最多的萜烯烴類成分下降到了37％左右，D-檸檬烯仍是其主要成分。與其它品種相比，香櫞果皮中仍更多的芳香組化合物，代表性物質(zhì)為1，6-辛二烯-3-醇，3，7-二甲基-，2-氨基苯甲酸，與果肉中保持一致。

11、　　5個柑橘品種感染腳腐病菌后，果皮共檢測出了204種揮發(fā)性物質(zhì)，其中紅肉臍橙、沿溪晚蘆椪柑、香櫞、夏橙和紅藜檬別檢出了114、75、64、70和75種揮發(fā)性物質(zhì)，總含量分別為2014.55μg g-1、4992.29μg g-1、9385.86μgg-1、1799.32μg g-1和5386.32μg g-1。柑橘染病后揮發(fā)性物質(zhì)含量較損傷組表現(xiàn)出不一致的差異，其中臍橙下降25.98％、、椪柑下降25.66％和香緣下降31.39％，夏

12、橙增加17.7％，紅藜檬增加208.09％。揮發(fā)性組分中變化最明顯的是萜烯類中的D-檸檬烯，在臍橙中占揮發(fā)性成份下降比例的106％，在椪柑中占下降比例的77％，在香緣中占下降比例的54％，在夏橙中占上升比例的104％，在紅藜檬中占上升比例的27％。在紅藜檬中在上升比例的較高的物質(zhì)還有(-)-4-萜品醇、α-松油醇、α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯和異松油烯等。
　　5.5個柑橘品種11種類黃酮含量的變化
　　染病后，臍橙、椪柑和香