‘滁菊’病毒脫除及脫毒苗活性成分含量分析.pdf

1、‘滁菊’(Chrysanthemum morifolium(Ramat.)Tzvel.‘Chuju’）是菊科菊屬多年生的草本植物。因其獨(dú)特而良好的養(yǎng)生及藥用功效，名列中國四大藥菊之首，還是安徽省“四大”著名藥材之首。近年來，‘滁菊’在我國的栽培面積逐步擴(kuò)大，但由于在數(shù)百年的栽培過程中，長期營養(yǎng)繁殖導(dǎo)致其病毒感染較嚴(yán)重，出現(xiàn)種質(zhì)退化，花變異發(fā)紅，花朵品質(zhì)變差等現(xiàn)象，嚴(yán)重阻礙和制約了‘滁菊’產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展。本文從‘滁菊’的病毒檢測(cè)開始，確定感

2、染病毒種類，比較了3種主要脫毒方法對(duì)‘滁菊’病毒脫除的效果，并對(duì)脫毒植株的遺傳穩(wěn)定性和葉片活性成分含量進(jìn)行了評(píng)價(jià)，建立了‘滁菊’病毒檢測(cè)和高效脫毒的技術(shù)體系，為‘滁菊’脫毒苗的推廣和應(yīng)用提供了有力的理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.以田間表現(xiàn)出癥狀，疑似感染病毒的‘滁菊’為材料，通過電鏡檢測(cè)和巢式RT-PCR兩種方法檢測(cè)侵染‘滁菊’的主要病毒，最終病毒檢測(cè)結(jié)果表明:侵染‘滁菊’的主要病毒為菊花B病毒(CVB)和菊花矮化類病毒(

3、CSVd);建立了以巢式RT-PCR為基礎(chǔ)，以CVB病毒的5'序列反向引物為特異引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到特異cDNA的高靈敏度檢測(cè)菊花B病毒體系，其靈敏度高達(dá)10-9，有效地解決了現(xiàn)有病毒檢測(cè)技術(shù)中對(duì)菊花B病毒的檢測(cè)靈敏度不高，易出現(xiàn)假陽性等問題，為田間早期的菊花病毒病防控提供了有效的幫助。
　　2.進(jìn)一步通過莖尖分生組織培養(yǎng)、熱處理結(jié)合莖尖分生組織培養(yǎng)及化學(xué)試劑病毒唑結(jié)合莖尖分生組織培養(yǎng)3種脫毒方法對(duì)‘滁菊’病毒進(jìn)行脫除，比較了3種脫

4、毒方法的‘滁菊’莖尖存活率和脫毒效果。結(jié)果表明:一次莖尖分生組織培養(yǎng)的存活率最高，為78.78％;病毒唑添加濃度為10 mg/mL時(shí)莖尖存活率較高;熱處理結(jié)合莖尖分生組織培養(yǎng)和化學(xué)試劑結(jié)合莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒效果較單獨(dú)采用莖尖分生組織培養(yǎng)的脫毒效果好。
　　3.在DNA水平上，利用12對(duì)SRAP引物組合對(duì)3種不同脫毒方法獲得的脫毒苗以及常規(guī)無菌組培苗進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性分子檢測(cè)，結(jié)果表明3種不同脫毒方法獲得的脫毒苗與常規(guī)無菌苗之間未檢測(cè)