蛹蟲(chóng)草液體培養(yǎng)及其有效成分含量分析.pdf

1、本文以蛹蟲(chóng)草菌為實(shí)驗(yàn)材料，系統(tǒng)而深入地研究了蛹蟲(chóng)草液體發(fā)酵的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件的優(yōu)化，并在所得的優(yōu)化培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件下進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。然后對(duì)菌絲體和發(fā)酵液中的多糖，菌絲體中的蟲(chóng)草素分別進(jìn)行了含量測(cè)定，并對(duì)它們的提取純化工藝進(jìn)行了研究，結(jié)果如下： 1.對(duì)接種量(％)、發(fā)酵溫度(℃)、初始pH值、發(fā)酵周期(h)進(jìn)行單因素試驗(yàn)分析。在此基礎(chǔ)上，對(duì)以上四因素進(jìn)行四因素三水平的正交實(shí)驗(yàn)分析。確定了最佳發(fā)酵條件為：接種量10％，發(fā)酵溫度27℃，

2、初始pH7，發(fā)酵周期96h。 2.以菌絲體干重及粗多糖重量為指標(biāo)，對(duì)五種碳源進(jìn)行多重比較。結(jié)果顯示：葡萄糖、麥芽糖、白糖、蔗糖、可溶性淀粉之間在0.05水平上均存在顯著差異(P＜0.05)。選用葡萄糖為最佳碳源，濃度應(yīng)控制在4.0-5.0g/L之間。 3.以菌絲體干重及粗多糖重量為指標(biāo)，對(duì)五種氮源進(jìn)行多重比較。結(jié)果顯示：酵母膏、蛋白胨、硝酸鈉、氯化銨、牛肉膏之間在0.05水平上均存在顯著差異(P＜0.05)。選用蛋白胨為

3、最佳氮源，最適氮源濃度為2.0g/L。 4.以葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、FeSO4為原料，進(jìn)行四因素三水平的正交試驗(yàn)分析。結(jié)果顯示：對(duì)菌絲體得率影響最大的為葡萄糖，其次分別為蛋白胨、KH2PO4和FeSO4。最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件為葡萄糖5g/100ml、蛋白胨0.2g/100ml、FeSO40.001g/100ml、KH2PO40.05g/100ml。 5.從最優(yōu)化培養(yǎng)基條件下進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，對(duì)菌絲體及發(fā)酵液中粗多糖進(jìn)行提

4、取、分離、純化，通過(guò)Sevage法除蛋白及葡聚糖凝膠柱層析，得到精多糖。結(jié)果為：菌絲體精多糖得率為1.7228g/100g干菌絲體；發(fā)酵液精多糖得率為0.1007g/L發(fā)酵液。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得菌絲體中精多糖的含量為70.30％，發(fā)酵液中精多糖的含量為66.90％。 6.從最優(yōu)化培養(yǎng)基條件下進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，對(duì)其進(jìn)行菌絲體中蟲(chóng)草素的提取、分離、純化，通過(guò)陰離子交換樹(shù)脂得到蟲(chóng)草素結(jié)晶，得率為53.88mg/100g干菌絲體。對(duì)其進(jìn)行含量