基于糖譜法比較不同茶多糖結(jié)構(gòu)特征及酶法修飾抗氧化活性研究.pdf

1、本研究應(yīng)用糖譜法對6種茶源多糖建立一種特異性強(qiáng)、選擇性高的表征多糖化學(xué)特征性圖譜的新方法，為茶源多糖質(zhì)量控制研究提供思路;同時(shí)，在酶法修飾后，結(jié)合體外抗氧化生理活性指標(biāo)，進(jìn)一步篩選出活性強(qiáng)的多糖酶解產(chǎn)物，為茶源多糖保健食品開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　主要工作內(nèi)容如下:
　　1.基于星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面的茶多糖優(yōu)化提取和分離除雜
　　選用具有精度更高的非線性數(shù)學(xué)模型擬合方法，引入星點(diǎn)設(shè)計(jì)CCD方法，結(jié)合效應(yīng)面RSM首次報(bào)道了優(yōu)選

2、茶樹花的制備工藝。在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，最佳方法結(jié)果為:料液比1∶14.5，時(shí)間2.08，溫度79.1。比較預(yù)測值和實(shí)驗(yàn)值的偏差絕對值均小于5％。結(jié)果表明，所建立的數(shù)學(xué)模型具有良好的預(yù)測性，所選茶樹花多糖提取工藝條件重現(xiàn)性好。
　　采用沸水提醇沉法提取得到6種粗多糖（人工高硒多糖、人工低硒多糖、人工空白多糖、天然富硒多糖、鄧村綠茶多糖、茶樹花多糖），其中總糖含量由大到小為人工空白多糖＞茶樹花多糖＞鄧村綠茶多糖＞人工低硒多糖＞人工高硒

3、多糖＞天然富硒多糖，茶樹花多糖較高。BCA法分析可知，多糖中還存在一定含量的蛋白，說明所得多糖均為糖蛋白。
　　2.基于糖譜法的茶多糖GPC圖譜構(gòu)建、分子量及單糖測定
　　糖譜法是針對多糖結(jié)構(gòu)特征建立的一種特異性強(qiáng)、選擇性高的表征多糖化學(xué)特征性圖譜的新方法，不同茶源多糖建立的指紋凝膠色譜GPC具有一定特異性，存在3-4個(gè)峰。在最適酶解后，對比酶解前后結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酶解GPC特征指紋圖譜能很好的指向多糖的分子量質(zhì)量和分布，如需要區(qū)

4、分人工低硒多糖和茶花多糖、高硒多糖、天然富硒多糖等其他茶源多糖，在透明質(zhì)酸酶催化作用后，人工低硒多糖并沒有出現(xiàn)相應(yīng)的新峰或峰的消失，然而其他多糖均有新峰的產(chǎn)生，從而實(shí)現(xiàn)對不同茶源多糖的快速有效區(qū)分。
　　分子量分布結(jié)果表明，六種多糖均屬于粗多糖，存在3-4個(gè)分子峰，分子量分布主要在20萬左右和200-300萬重均分子量，均存在寡糖片段。不同糖苷酶水解后，不同茶源多糖呈現(xiàn)出不同水解糖片段。如茶樹花多糖存在四個(gè)峰，重均分子量分別是25

5、73536，249052，4650.88，690.30，人工低硒多糖存在三個(gè)峰，重均分子量分別是3667830，272319，1342.82。不同茶源多糖在酶解前后的對于茶樹花多糖為而言，加入纖維素酶后，分子量分布為10萬和200萬為主，跟原茶樹花相比，分子量分布為20萬和200萬，說明茶樹花多糖的主鏈上存在β-1，4-葡萄糖苷鍵，對于主鏈也有一定作用;此外，原茶樹花多糖的其他分子量分布為4650.88、690.30，纖維素酶催化水解后

6、重均分子量為1535.89、407.11、133.25，小片段的糖鏈出現(xiàn)說明纖維素酶可能有效水解茶樹花多糖支鏈。單糖組成分析表明，人工高硒多糖、人工低硒多糖、人工不富硒多糖、天然富硒多糖、鄧村綠茶多糖、茶樹花多糖均含有鼠李糖、果膠糖（阿拉伯糖）、半乳糖、葡萄糖，具有高度相似的單糖組成。因此，本實(shí)驗(yàn)方法有利于表征茶源多糖的大分子特性，可為茶源多糖質(zhì)量控制作參考。
　　3.茶多糖的酶法修飾改性及其對體外抗氧化活性研究酶法修飾改性是獲取

7、高活性茶多糖的重要手段。首先，建立了一種基于96孔板體外抗氧化(DPPH)篩選方法，最佳條件為:總反應(yīng)體積設(shè)置為200ul（多糖樣品50ul和DPPH溶液150ul），孵育溫度設(shè)置為25℃，避光顯色反應(yīng)30分鐘，514nm測定。
　　不同酶解后，六種多糖的活性相差較大，其中茶樹花多糖活性較好，果膠酶酶解后抗氧化活性最好，如茶樹花多糖EC50為177.2ug/ml，與葡聚糖酶酶解后活性相當(dāng)，EC50為183.5ug/ml，果膠酶酶解

8、后和纖維素酶酶解后的活性相當(dāng)，EC50為162.6ug/ml、166.9ug/ml，DPPH清除能力提高了8.2％、6.1％。結(jié)果提示，用糖苷酶適當(dāng)水解茶多糖能夠提高其清除自由基能力，達(dá)到改善其活性的目的。茶多糖酶法修飾后活性提高與其分子鏈變化有較大關(guān)聯(lián)，茶多糖經(jīng)過酶法修飾改性后無論是重均分子量還是數(shù)均分子量都明顯變小，酶法修飾后出現(xiàn)的小片段糖片段分散系數(shù)多數(shù)為1.0-1.3，提示茶多糖分子鏈轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄬恍浴?br>　　結(jié)合多糖的化學(xué)