酶解豬皮明膠抗氧化活性和抗疲勞功效的研究.pdf

1、本研究所用豬皮明膠經(jīng)檢測蛋白質(zhì)含量為90.75％，pn值為5.88±0.17，并對其氨基酸組成進(jìn)行了分析，對明膠溶液的DPPH·、O2-·、·OH清除率和總還原力進(jìn)行了檢測。以豬皮明膠為底物，用胰蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶于各酶類的最優(yōu)條件下水解，并以水解度、自由基清除率和總還原力作為評價(jià)指標(biāo)。通過試驗(yàn)研究得知，對底物的水解度最高和總還原力最佳的水解酶是堿性蛋白酶;對DPPH·、O2-·、·OH清除

2、率最大的依次為木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶。
　　 以DPPH·、O2-·、·OH的清除率和總還原力為檢測指標(biāo)，對所選四種酶進(jìn)行單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)。其中，采用木瓜蛋白酶在pH值6.4、水解溫度60℃、酶用量0.03g/g、水解時(shí)間4h時(shí)，所得產(chǎn)物對DPPH·的清除率可達(dá)90.63％;中性蛋白酶于pH值7.4、水解溫度43℃、酶用量o.05g/g、水解時(shí)間2h的條件下，產(chǎn)物對O2-·的清除率為77.39％;胰蛋白酶水解條件為p

3、H值6.6、水解溫度37℃、酶用量o.05g/g、水解時(shí)間3h時(shí)，對·OH清除率是97.73％;堿性蛋白酶在pH值8.0、水解溫度57℃、酶用量0.06g/g、水解時(shí)間5h的條件下水解，水解產(chǎn)物的總還原力可達(dá)0.315。
　　 在單酶水解試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對已篩選的四種酶進(jìn)行雙酶組合水解試驗(yàn)，并檢測酶解液的抗氧化功效。試驗(yàn)結(jié)果顯示雙酶比單酶水解產(chǎn)物的總還原力和對DPPH·清除率下降顯著;水解度及對O2-·清除率明顯提高;·OH清除率

4、基本穩(wěn)定。
　　 通過胃蛋白酶和胰蛋白酶的復(fù)合水解，用來模擬人體的自然生理消化過程。經(jīng)過該模擬人體消化試驗(yàn)，單酶及雙酶水解物均對DPPH·的清除率下降;總還原力和對O2-·的清除率有所上升;清除·OH的能力變化不大，穩(wěn)定性最好。
　　 通過體內(nèi)抗氧化和抗疲勞試驗(yàn)，檢測出試驗(yàn)組小白鼠血液、肌肉、肺和肝臟中的總超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶及過氧化氫酶的活力明顯高于對照組;丙二醛的生成量明顯低于對照組;總抗氧化能力高于對

5、照組，可說明豬皮明膠肽在小白鼠體內(nèi)有明顯的抗氧化活力。經(jīng)不同負(fù)荷的抗疲勞試驗(yàn)，檢測出試驗(yàn)組中小白鼠的疲勞游泳時(shí)間明顯長于對照組;全血乳酸、尿素氮的生成量明顯低于對照組;肝糖元和肌糖元的含量明顯高于對照組，這表明明膠肽具有極好的抗疲勞功效。對豬皮明膠肽的抗氧化活力與抗疲勞功效的相關(guān)性進(jìn)行檢測，表明兩者相關(guān)性較好，相關(guān)系數(shù)為0.8529。
　　 應(yīng)用膜分離技術(shù)分離明膠肽，檢測表明分子量小于5K明膠肽組分的·OH清除率達(dá)到98.83％

6、，證實(shí)初步分離后所得小分子量明膠肽具有更好的自由基清除功效。最后，明膠水解液經(jīng)陰陽離子樹脂除鹽、5％活性炭除色除味、0.4％檸檬酸調(diào)節(jié)酸味、0.1％阿巴斯甜調(diào)節(jié)甜味，真空冷凍干燥后制成抗疲勞產(chǎn)品。
　　 本試驗(yàn)在國內(nèi)外酶解動(dòng)植物蛋白制備肽類的研究基礎(chǔ)上，對豬皮明膠的酶解工藝進(jìn)行研究，并檢測明膠肽體內(nèi)外抗氧化活性與體內(nèi)抗疲勞功效，分析二者之間的關(guān)系。有望為抗疲勞機(jī)理提供試驗(yàn)基礎(chǔ)，為抗疲勞肽的體外篩選提供方便快捷的檢測方法。同時(shí)對更