蕨麻對(duì)低壓缺氧大鼠的保護(hù)作用及腦紅蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：建立大鼠低壓缺氧損傷(hypobaric hypoxic iniury，HHI)模型，研究蕨麻醇提物對(duì)大鼠急性低壓缺氧損傷的保護(hù)作用，以及對(duì)腦紅蛋白(Neuroglobin，Ngb)表達(dá)的影響。 方法：選取雄性SD大鼠78只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(C)、損傷模型組(M)、蕨麻醇提取物3.6g/kg(H)，1.8g/kg(I)，0.9g/kg(L)干預(yù)組。連續(xù)灌胃給藥14天后，持續(xù)缺氧12h，壓力-0.06Mpa(相當(dāng)于海拔約

2、7000m)。H.E常規(guī)染色探討大鼠HHI后心、腦、腎臟的形態(tài)學(xué)變化：采用ELISA方法檢測(cè)血清中ET-1及CGRP含量變化；采用透射電鏡技術(shù)檢測(cè)神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的變化；干濕比重法檢測(cè)各組大鼠腦含水量變化；免疫組化檢測(cè)Ngb蛋白表達(dá)的定位，RT-PCR和Western Blot方法分別檢測(cè)大腦皮質(zhì)Ngb mRNA及蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：1、蕨麻醇提物對(duì)大鼠HHI后保護(hù)作用：(1)H.E染色觀察心、腦、腎形態(tài)學(xué)改變：模型組大鼠心肌纖

3、維排列紊亂，出現(xiàn)片狀嗜酸性變，可見波浪狀損傷，局部出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)；蕨麻3.6g/kg組損傷明顯減輕，肌纖維排列基本整齊，偶見點(diǎn)狀嗜酸性染色，未見炎細(xì)胞浸潤(rùn)及波浪狀損傷。模型組大鼠腦冠狀切片H.E染色可見海馬各區(qū)細(xì)胞均以壞死和凋亡為主，可見大部分細(xì)胞固縮變形，胞漿深染，軸突斷裂或消失。頂葉皮質(zhì)神經(jīng)元水腫明顯，細(xì)胞固縮，軸突斷裂或消失，凋亡：蕨麻醇提物3.6g/kg和1.8g/kg組，海馬各區(qū)神經(jīng)元損傷程度減輕，形態(tài)接近較正常組，胞漿均勻飽

4、滿，淡染。核仁明顯，細(xì)胞排列均一。模型組腎小球近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)有大量大小不等的圓形紅染小滴(玻璃樣變性)。蕨麻3.6g/kg組未見玻璃樣小滴沉積。(2)神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化：損傷后，神經(jīng)元胞質(zhì)高度水腫，細(xì)胞器數(shù)量明顯減少，排列紊亂、散在；線粒體大部分脊和膜融合、消失；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象嚴(yán)重，部分雙層核膜融合、消失；細(xì)胞核、質(zhì)水腫。蕨麻3.6g/kg組細(xì)胞器未見明顯病理改變，損傷程度明顯減輕。(3)腦含水量變化：損傷后腦含水量平均值(

5、75.05±3.6％)，與正常組(68.04±0.6％)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。蕨麻醇提物3.6g/kg能明顯降低大鼠腦含水量(P＜0.01)。(4)ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HHI后大鼠血清ET-1與CGRP含量變化：模型組大鼠血清ET-1含量顯著升高(P＜0.01)，CGRP含量顯著降低，ET-1/CGRP比值顯著高于正常組。各蕨麻醇提物干預(yù)組均能明顯降低損傷后大鼠血清中ET-1的含量(P＜0.01)。蕨麻醇提物3.6g/kg和1

6、.8g/kg組大鼠血清CGRP含量較模型組顯著增加(P＜0.01)。其中3.6g/kg組血清ET-1/CGRP比值與正常組無明顯差異(P＞0.05)。2、蕨麻醇提物對(duì)HHI大鼠Ngb表達(dá)影響：(1)免疫組化：正常對(duì)照組僅見皮質(zhì)神經(jīng)元有少量Ngb表達(dá)，陽性反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色顆粒，海馬各區(qū)未見Ngb表達(dá)。模型組皮質(zhì)Ngb蛋白表達(dá)量明顯增加，陽性細(xì)胞數(shù)增多，胞漿、胞核均可見棕黃色顆粒的表達(dá)(P＜0.01)。海馬各區(qū)未見Ngb表達(dá)。與模型組相比，

7、蕨麻醇提物3.6g/kg和1.8g/kg組大鼠皮質(zhì)Ngb蛋白表達(dá)顯著增加，單位面積內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。海馬區(qū)：各實(shí)驗(yàn)組觀察，正常組與模型組未見海馬各區(qū)有Ngb蛋白的表達(dá)。蕨麻醇提物3.6g/kg組海馬CA1、CA2區(qū)有少量棕黃色顆粒表達(dá)。(2)Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Ngb蛋白含量變化：與正常對(duì)照組相比，模型組Ngb表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)，與模型組比較，蕨麻醇提物3.6g/kg Ngb蛋白表達(dá)顯著增高(P＜0.01)

8、。(2)RT-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠腦皮質(zhì)中Ngb mRNA含量變化：模型組大鼠腦皮質(zhì)Ngb mRNA明顯增高(P＜0.01)，蕨麻醇提物3.6g/kg明顯高于模型組(P＜0.01)。 結(jié)論：蕨麻醇提物能減輕大鼠低壓缺氧所致心、腦、腎臟損傷的程度；減輕腦組織超微結(jié)構(gòu)的病理變化程度；降低大鼠腦水腫；可以有效抑制ET-1的釋放，促進(jìn)CGRP釋放，通過維持ET-1和CGRP的動(dòng)態(tài)平衡來拮抗ET-1的血管損害作用；能促進(jìn)Ngb mRNA及其