共軛亞麻酸的氨基酸、多元醇修飾及其對(duì)氧化穩(wěn)定性、細(xì)胞活性的影響.pdf

1、共軛亞麻酸(ConjugatedLinolenicacid，CLnA)是碳鏈長度為十八，含有一個(gè)共軛三烯體系的長鏈脂肪酸的總稱，含有多種位置及幾何異構(gòu)體。由于具有抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂、降血糖、減肥、提高免疫力等非常有益的生理活性，被譽(yù)為“21世紀(jì)的新型營養(yǎng)因子”，引起了廣泛的關(guān)注。目前科學(xué)家在共軛亞麻酸的合成、表征、分離分析、體內(nèi)代謝、活性機(jī)理等方面已經(jīng)取得了一系列重要的研究成果。
　　 但目前共軛亞麻酸的研究存在一突出

2、問題，即其氧化穩(wěn)定性極差，這大大影響了產(chǎn)業(yè)化。例如在50度的空氣中，共軛亞麻酸僅需數(shù)小時(shí)即完全氧化。目前普遍采用的提高脂肪酸穩(wěn)定性的方法主要有:與食用油脂混合、酯交換法、微囊化（包埋法）、環(huán)糊精包合、添加抗氧化劑等。但是這些方法在提高共軛亞麻酸穩(wěn)定性方面，效果均欠佳。
　　 本論文采用目前較新的分子修飾法來提高共軛亞油酸的氧化穩(wěn)定性。具體而言，我們選用氨基酸（包括三種極性氨基酸、非極性氨基酸）、雙甘二肽、多元醇（山梨醇、木糖醇、

3、赤蘚糖醇）作為修飾分子，對(duì)共軛亞麻酸進(jìn)行了酰胺化以及酯化修飾，借此來提高共軛亞麻酸氧化穩(wěn)定性。同時(shí)，共軛亞麻酸的活性機(jī)制目前仍不明確，許多研究認(rèn)為可能和它的氧化情況密切相關(guān)。因此氧化穩(wěn)定性的改變是否會(huì)影響到其活性，也是我們非常關(guān)心的一個(gè)問題。本研究以PC12細(xì)胞株作為體外模型，考察了經(jīng)過修飾之后的CLnA衍生物對(duì)該細(xì)胞的胞質(zhì)活性、形態(tài)、代謝等方面的變化。
　　 在本論文的第一章，我們對(duì)CLnA的結(jié)構(gòu)、生理活性、合成方法以及常用的

4、表征手段等進(jìn)行了概述。接著重點(diǎn)概述了CLnA氧化穩(wěn)定性的研究進(jìn)展，包括其測(cè)試手段、氧化機(jī)制、提高氧化穩(wěn)定性的方法、氧化與抗癌活性之間的復(fù)雜關(guān)系等。接著介紹了目前CLnA研究中存在的主要問題，并據(jù)此提出了本論文的研究目的和內(nèi)容。
　　 第二章中我們選取了三種極性氨基酸，即甘氨酸、酪氨酸和賴氨酸作為修飾分子，通過溫和的DCC/DMAP縮合法，得到了三種極性氨基酸一共軛亞麻酸衍生物。UV、FT-IR、1H-NMR表明它們分別是甘氨酸酰

5、胺化-CLnA、酪氨酸酰胺化-CLnA和賴氨酸-CLnA鹽。氧化穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果表明，相比于游離CLnA，這些衍生物的氧化穩(wěn)定性大幅提高，其中尤以甘氨酸酰胺化-CLnA明顯。此外衍生物在水中的分散性大大優(yōu)于游離CLnA，透射電鏡表明這些衍生物在水中呈納米顆粒狀或棒狀。這些研究結(jié)果對(duì)于提高將來CLnA產(chǎn)品的保質(zhì)期以及使用范圍，都將是大為有利的。針對(duì)PC12細(xì)胞的體外模擬實(shí)驗(yàn)表明，上述衍生物在低濃度(4ug/mL)時(shí)對(duì)PC12細(xì)胞的細(xì)胞活性大

6、為降低，而在高濃度(500ug/mL)時(shí)和游離CLnA基本一致。
　　 第三章我們采用三種非極性氨基酸，即丙氨酸、亮氨酸、異亮氨酸為修飾分子，經(jīng)脫水縮合得到氨基酸-CLnA衍生物。UV、FT-IR、1HNMR結(jié)果表明他們分別是丙氨酸酰胺化-CLnA、亮氨酸酰胺化-CLnA、異亮氨酸酰胺化-CLnA。隨后的氧化穩(wěn)定性測(cè)試表明，它們的穩(wěn)定性相比CLnA有所提高，但是幅度沒有第二章中的極性氨基酸-CLnA衍生物明顯。針對(duì)PC12細(xì)胞的

7、體外模擬實(shí)驗(yàn)表明，上述衍生物在低濃度(4ug/mL)時(shí)對(duì)PC12細(xì)胞的細(xì)胞活性大為降低，而在高濃度(500ug/mL)時(shí)和游離CLnA基本一致。
　　 第四章我們以甘氨酸二肽作為修飾分子，合成到了甘氨酸二肽酰胺化-CLnA衍生物并進(jìn)行了UV、FT-IR、1H-NMR表征。HRTEM、氧化穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果表明該產(chǎn)物的分散性以及穩(wěn)定性均有大幅度提高，且比極性氨基酸-CLnA、非極性氨基酸-CLnA的提高幅度要大。同時(shí)，該衍生物在低濃度

8、下的細(xì)胞活性降低，而高濃度時(shí)和游離CLnA基本一致。
　　 第五章我們以三種多元醇分子，包括赤蘚糖醇、木糖醇、山梨醇作為修飾分子，合成到了赤蘚糖醇酯化-CLnA、木糖醇酯化-CLnA、山梨醇酯化-CLnA，并進(jìn)行了UV、FT-IR、1H-NMR表征。HRTEM、氧化穩(wěn)定性測(cè)試表明他們?cè)谒械姆稚⑿砸约胺€(wěn)定性均得到了極大提高。同時(shí)，該衍生物在低濃度下的細(xì)胞活性降低，而高濃度時(shí)和游離CLnA基本一致。
　　 總之，本研究采用