Alpha-亞麻酸對大鼠肝臟、HepG2細胞脂肪酸氧化及合成的影響.pdf

1、1.目的
　　通過n-3PUFA飲食防控高脂血癥已成為預防和治療脂代謝紊亂疾病新關注方向，有研究者提出合理添加膳食n-3PUFA可減少肥胖帶來的經(jīng)濟負擔[1]。日常食用油中n-3PUFA含量較低，含較高n-3PUFA的魚油、亞麻籽油及蘇子油在飲食中所占的比例過低。臨床和動物實驗均表明n-3PUFA可降低血脂，但其調(diào)節(jié)機制以及劑量對血脂代謝相關基因表達的影響尚不清楚。
　　我們認為n-3PUFA調(diào)節(jié)血脂可能源自n-3PUFA對

2、脂代謝相關基因表達的調(diào)控，如調(diào)控脂肪酸氧化及合成、膽固醇代謝關鍵基因表達，同時基因表達程度可能與n-3PUFA劑量有關。本實驗擬通過動物體及細胞研究ALA對血脂及脂肪酸氧化、合成關鍵基因表達的調(diào)控，探討ALA降低血脂機制，為ALA在血脂代謝紊亂預防及治療中的應用提供科學數(shù)據(jù)。
　　2.內(nèi)容
　　本實驗通過給予SD大鼠紫蘇子油高脂日糧，分析高劑量攝入蘇子油大鼠血脂生化指標、肝細胞脂肪酸氧化關鍵基因PPARα及CPT1 A，脂肪

3、酸合成關鍵基因SREBP1C、FAS及ACC，膽固醇合成基因SREBP2和HMGCR mRNA、蛋白表達水平;在動物實驗基礎上進一步從細胞水平分析不同劑量ALA干預硬脂酸處理后的HepG2細胞上述基因mRNA、蛋白表達情況，探討ALA影響大鼠肝臟及HepG2細胞脂肪酸氧化及合成的相關機制。
　　3.方法
　　SD大鼠16只隨機分為2組，分別為對照組(NC)、蘇子油組(TUF)，16周后測量血清總膽固醇(TCH)、甘油三酯(T

4、C)、低密度脂蛋白脂(LDL-c)、高密度脂蛋白脂（HDL-c）、游離脂肪酸(FFA)水平，實時定量PCR和免疫印跡法(Western blotting)檢測脂肪酸氧化、合成關鍵基因mRNA水平及蛋白表達量。
　　HepG2細胞分為對照組(NC)以及含有0.5mmol/L硬質(zhì)酸的培養(yǎng)液培養(yǎng)高脂組(HF)，培養(yǎng)36h后應用實時定量PCR檢測脂肪酸氧化及合成關鍵基因表達。上述處理脂肪酸氧化及合成基因表達存在顯著差異，其中脂肪酸氧化基因

5、及合成基因均顯著高于對照組，而膽固醇合成下游基因HMGCR則顯著降低，之后分別應用10％、20％、50％、70％、100％ALA替代硬脂酸培養(yǎng)36h，實時定量PCR和免疫印跡法檢測檢測脂肪酸氧化、合成及膽固醇代謝關鍵基因mRNA水平及蛋白表達量。
　　4.結果
　　4.1.大鼠肝臟
　　(1)蘇子油組血清TG、TC、HDL-c含量顯著降低（P＜0.001）;而LDL-c、FFA與對照組沒有顯著性差異;
　　(2)

6、定量PCR結果顯示蘇子油組基因CPT1A相對表達量與對照組比較無差異，而PPARα則顯著升高(P=0.0016); SREBP1C、FAS、ACC相對表達量顯著升高(P=0.0006、P=0.0228、P=0.0028);SREBP2相對表達量顯著升高(P=0.007)，而HMGCR無統(tǒng)計學差異;
　　(3)蛋白表達結果顯示蘇子油組CPT1A表達升高，PPARα表達降低;ACC、FAS、SREBP1C低于對照組;HMGCR高于對照

7、組，而SREBP2表達則無顯著差異。
　　4.2.HepG2細胞
　　(1) ALA替代組與高脂組比較PPARα及CPT1A基因mRNA表達水平無統(tǒng)計學差異，70％ALA替代組及100％ALA替代組脂肪酸氧化基因基因CPT1A蛋白表達增強，其余各組差異不明顯，100％ALA替代組PPARα蛋白表達降低，其余各組則無明顯差異;
　　(2) ALA替代組SREBP1C基因mRNA表達水平均顯著低于高脂組(P＜0.001)，

8、100％ALA組及70％ALA組FAS顯著低于高脂組(P＜0.001)，替代組ACC基因mRNA水平與高脂組無統(tǒng)計學差異，SREBP1C及FAS蛋白表達水平顯著低于高脂組，而ACC蛋白表達量與高脂組無明顯差異;
　　(3)20％ALA、50％ALA、70％ALA、100％ALA替代組HMGCR基因mRNA表達水平顯著高于高脂組(P＜0.001)，而ALA替代組SREBP2基因mRNA表達量與高脂組無統(tǒng)計學差異，HMGCR蛋白表達明

9、顯升高，而SREBP2蛋白表達量與高脂組無明顯差異。
　　5.結論
　　5.1.大鼠肝臟
　　(1)長時間、高劑量攝入蘇子油明顯降低大鼠血脂;
　　(2)過量攝入蘇子油促進大鼠肝臟脂肪酸氧化基因mRNA表達，對蛋白表達存在不同影響;
　　(3)高劑量蘇子油攝入促進大鼠肝臟脂肪酸合成基因mRNA表達，抑制其蛋白表達，對大鼠肝臟脂肪酸合成關鍵基因存在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用;
　　(4)過量攝入蘇子油促進大鼠肝臟S

10、REBP2基因mRNA表達，增強HMGCR蛋白表達，蘇子油降低血清膽固醇不能通過合成途徑實現(xiàn)。
　　5.2.HepG2細胞
　　(1)硬脂酸處理后HepG2細胞脂肪酸氧化及合成關鍵基因mRNA表達增強，膽固醇合成關鍵基因mRNA表達減弱;
　　(2)高比例替代ALA通過增強CPT1A表達來促進HepG2細胞脂肪酸氧化，實現(xiàn)過程不依賴PPARα;
　　(3) ALA替代硬脂酸隨濃度升高對脂肪酸合成關鍵基因表達的抑制