精索靜脈曲張對生精功能的影響及導(dǎo)致不育機(jī)制的探討.pdf

1、目的：通過建立實驗性精索靜脈曲張(VC)大鼠模型，觀察睪丸組織的病理切片，描述睪丸組織，生精細(xì)胞及睪丸間質(zhì)的病理改變，并通過測定血清睪酮、血清抑制素B的濃度，了解VC對睪丸生精上皮的直接損害，及機(jī)體下丘腦-垂體-性腺軸反饋性調(diào)節(jié)狀況，探討VC對睪丸組織生精功能的影響及導(dǎo)致不育的機(jī)制。
　　方法：動物分組：選擇鼠齡(50±10)天(青春期)，體重240～280g的SD(Sprayue-Dawley)三級雄性大鼠40只。將大鼠按隨機(jī)化

2、原則分為精索靜脈曲張組(試驗組)20只，假手術(shù)組(對照組)20只。
　　模型建立：動物模型依據(jù)Turner的方法建立：實驗組大鼠以10％水合氯醛(3.33 ml/kg)腹腔注射麻醉，麻醉成功后，取腹正中切口約5cm，切開全層腹壁，暴露腹腔。確認(rèn)左側(cè)腎臟，左腎上腺靜脈，左精索靜脈位置后，仔細(xì)分離左腎靜脈，在左腎上腺靜脈與下腔靜脈之間的左腎靜脈處，放置一根直徑約0.8 mm的金屬桿，用4-0絲線將其與左腎靜脈一同結(jié)扎，使靜脈直徑大約縮

3、小一半。結(jié)扎完成后抽出金屬桿，可見左腎靜脈迅速擴(kuò)張。以4-0的絲線縫合傷口。對照組大鼠在顯露左腎靜脈后只穿線打結(jié)，而不縮窄左腎靜脈。以精索靜脈最大直徑>1 mm，左右腎重量無明顯差別為模型建立成功標(biāo)準(zhǔn)。
　　標(biāo)本采集：術(shù)后12周，給與腹腔注射10％水合氯醛麻醉，成功后取下腹正中切口，暴露雙側(cè)腎臟，后采用10ml空針注射器，分別取下腔靜脈血4-5ml，置于離心管內(nèi)(不抗凝)，待標(biāo)本凝集后以3000轉(zhuǎn)/分，離心15min，取上層血清于

4、Eppendof管保存于-20℃待測。后切取左側(cè)睪丸，大鼠脫頸椎法處死，剪除睪丸周圍筋膜及附睪，用冷鹽水洗凈，濾紙吸干水分，置于10％中性甲醛溶液中固定24小時，后將睪丸切成1-2mm厚薄片，梯度脫水，石蠟包埋組織塊。
　　檢測方法：血清抑制素B的測定采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測，用酶標(biāo)儀測定每個樣本在450nm波長下的OD值，將吸光度值對照標(biāo)準(zhǔn)曲線得出每個樣本的濃度值。血清睪酮的測定采用Access Testostero

5、ne(化學(xué)發(fā)光法)測定，使用B ECKMAN COULTER DX I800全自動免疫分析儀嚴(yán)格按規(guī)定流程測定樣本血清睪酮濃度。睪丸組織切片后行HE染色，每張切片隨機(jī)選取10個視野，并對視野中的曲細(xì)精管生精上皮病理變化情況作出評分，其平均值為此樣本的Johnson評分。
　　統(tǒng)計學(xué)分析：血清睪酮濃度、血清抑制素B濃度及Johnson評分采用計量資料x-±s表示，樣本均數(shù)的比較利用兩獨立樣本t檢驗，采用SPSS13。0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分

6、析，以P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1血清睪酮檢測結(jié)果：實驗組SD大鼠術(shù)后3月，血清睪酮平均為5.21±0.44nmol/L，較對照組血清睪酮濃度5.49±0.49nmol/l，水平稍有下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2血清抑制素B檢測結(jié)果：實驗組SD大鼠術(shù)后3月血清抑制素B水平為392.90±52.37pg/ml，較對照組血清抑制素B水平764.90±60.65pg/ml明顯下降，差

7、異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　3 Johnson評分：實驗組大鼠睪丸組織的Johnson評分為7.44±1.00，與對照組評分9.48±0.28相比，明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　4睪丸病理改變結(jié)果：睪丸組織的病理損傷表現(xiàn)為：1、曲細(xì)精管內(nèi)生精細(xì)胞脫落，實驗組SD大鼠睪丸組織此種病變占90％，嚴(yán)重者可發(fā)生管腔堵塞。2、生精上皮基底膜增厚、纖維樣和透明變性占到75％；3、睪丸間質(zhì)病變，包括睪丸間質(zhì)

8、組織水腫、間質(zhì)細(xì)胞變性占65％；4、間質(zhì)血管病變，包括小動脈管壁增厚、管腔縮小甚至閉塞，小靜脈擴(kuò)張充血及淋巴管擴(kuò)張占85％。對照組僅發(fā)現(xiàn)兩例生精細(xì)胞脫落，及一例間質(zhì)水腫。差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1精索靜脈曲張會對睪丸生精組織產(chǎn)生不同程度的損害，而導(dǎo)致生精功能的降低。
　　2睪丸組織的損傷可通過使血清抑制素B水平降低，反饋性作用于下丘腦-垂體-性腺軸，代償性調(diào)節(jié)性腺功能。
　　3睪丸生精功能的維持與