應(yīng)用流式細胞術(shù)研究碳源對粘質(zhì)沙雷氏菌次級代謝調(diào)控的影響.pdf

1、粘質(zhì)沙雷氏菌是一種廣泛存在于自然界中的革蘭氏陰性菌，該菌是包括人類在內(nèi)的哺乳動物、腔腸動物、昆蟲、線蟲、植物等的條件致病菌。該菌的次級代謝產(chǎn)物靈菌紅素具備多種生物活性，其中最引人注意的是靈菌紅素引起癌細胞凋亡的作用機制完全不同于當(dāng)前的臨床抗癌藥物，是很有開發(fā)潛力的抗癌藥物?，F(xiàn)階段對細胞周期的研究主要停留在真核細胞上，本文創(chuàng)新性地將流式細胞術(shù)應(yīng)用到原核細胞中研究粘質(zhì)沙雷氏菌的生長代謝規(guī)律，可為臨床解決該菌引起的感染和靈菌紅素產(chǎn)量提高提供理

2、論指導(dǎo)，也為原核生物細胞周期規(guī)律的研究提供重要參考價值。
　　本論文主要研究了碳源對粘質(zhì)沙雷氏菌次級代謝調(diào)控的影響，首先在以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基中添加環(huán)磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP），研究cAMP在碳源代謝過程中的作用，然后用牛肉膏、蔗糖、甘油、葡萄糖分別發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素，比較不同碳源對靈菌紅素合成的影響。論文研究工作如下：（1）細胞內(nèi)cAMP的濃度升高時，碳源利用效率變高，細胞分

3、裂及DNA復(fù)制速度隨之加快，細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，靈菌紅素的生物合成過程被阻斷，表明cAMP影響細菌碳源代謝過程。（2）用不同碳源發(fā)酵生產(chǎn)靈菌紅素，菌體干重比較：牛肉膏>蔗糖>甘油>葡萄糖，靈菌紅素濃度比較：蔗糖>葡萄糖>甘油>牛肉膏。結(jié)合流式細胞儀檢測分析得：碳源種類不同時，碳源代謝途徑隨之改變，導(dǎo)致細菌分裂與遺傳物質(zhì)復(fù)制速率、細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、靈菌紅素生產(chǎn)能力的改變。實驗表明碳源對粘質(zhì)沙雷氏菌次級代謝有重要的調(diào)控作用，在四種碳源，牛肉膏

4、、蔗糖、甘油、葡萄糖中，蔗糖是最佳碳源。（3）細菌在正常代謝下，細胞分裂生長，遺傳物質(zhì)復(fù)制分配過程，次級代謝狀態(tài)與碳源代謝是一個協(xié)調(diào)的過程。
　　本文還對粘質(zhì)沙雷氏菌在5L發(fā)酵罐中的碳源、磷酸鹽、培養(yǎng)基配方、溶氧、補料過程進行了初步探討。結(jié)果為：發(fā)酵中保持溶氧30％以上，限制加入磷酸鹽，初始培養(yǎng)基配方：蔗糖0.25％，蛋白胨1.5％，氯化鈉0.5％，無水氯化鎂0.25％，吐溫-800.5％；發(fā)酵至50 h時進行補料，補料配方：蔗糖