PGAM2基因啟動子區(qū)變異鑒定及其與豬肉系水力的相關(guān)性研究.pdf

1、系水力(water holding capacity, WHC)是指豬肉在施加外力的條件下保持水分的能力，是衡量豬肉質(zhì)性狀的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。提高系水力可以避免豬肉中水分的大量流失，減少生產(chǎn)者在經(jīng)濟利益上的損失，同時可以改善豬肉的品質(zhì)和風(fēng)味。糖酵解途徑是影響系水力高低的關(guān)鍵因素之一，磷酸甘油酸變位酶(phosphoglycerate mutase，PGAM2)、磷酸化酶激酶(phosphorylase kinase gamma1，PHKG1

2、)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase A，LDHA)基因編碼糖酵解途徑中的關(guān)鍵酶，并且研究表明這三個基因與多個肉質(zhì)性狀密切相關(guān)，它們可能通過糖酵解途徑影響到系水力。因此，本實驗以PGAM2、PHKG1和LDHA基因作為候選基因，篩選啟動子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性(Single nucleotide polymorphism，SNP)位點，研究基因啟動子區(qū)SNP位點對基因表達水平的影響，及其與系水力的相關(guān)性，旨在尋找與系水

3、力相關(guān)的分子遺傳標(biāo)記。
　　本實驗首先選取了系水力高組和低組各14個樣品，通過對三個候選基因表達水平的分析，發(fā)現(xiàn)PGAM2和PHKG1基因的表達與系水力水平呈負(fù)相關(guān)(p＜0.05)。將高組和低組的DNA樣品進行混池，通過比較測序，在PGAM2啟動子區(qū)發(fā)現(xiàn)一個突變位點c.-360 T＞C，其等位基因在高組和低組之間的分布呈顯著差異。
　　通過等位基因特異性PCR技術(shù)(AS-PCR)對PGAM2基因c.-360 T＞C位點在17

4、0頭三元雜交豬中進行了基因分型，獲得CC，TT和CT三種基因型。統(tǒng)計分析表明，CC型個體的系水力顯著低于TT型個體(p＜0.05)。基因表達分析表明，CC型個體PGAM2基因表達水平顯著高于TT型個體(p＜0.05)。通過雙熒光素酶活性分析同樣顯示，CC型的啟動子活性顯著高于TT型(p＜0.05）。通過轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測，發(fā)現(xiàn)SNP位點c.-360C可以結(jié)合CREB，TAXCREB和v-Maf三種轉(zhuǎn)錄因子，c.-360T可以結(jié)合LTSM一種轉(zhuǎn)