便攜式血糖儀在生化分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、過(guò)去便攜式血糖儀只是單純地被糖尿病患者用來(lái)檢測(cè)血液中葡萄糖濃度，最近的研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)蔗糖轉(zhuǎn)化酶的紐帶作用，便攜式血糖儀同樣可被用于檢測(cè)一些非葡萄糖目標(biāo)物。本文通過(guò)便攜式血糖儀檢測(cè)技術(shù)為檢測(cè)生物小分子提供了新的檢測(cè)手段和思路。主要內(nèi)容包括：
　　⑴基于DNA適體傳感血糖儀測(cè)定多巴胺的研究。將多巴胺適體序列DNA1固定在金納米粒子修飾的96孔板表面，再將適體互補(bǔ)序列DNA2和蔗糖轉(zhuǎn)化酶修飾金納米粒子制備的信號(hào)探針通過(guò)雜交反應(yīng)固定在DN

2、A1和金納米粒子修飾的96孔板表面，構(gòu)成多巴胺適體傳感器。當(dāng)有目標(biāo)物多巴胺存在時(shí)，多巴胺與適體DNA1相互作用，釋放出信號(hào)探針，釋放出的信號(hào)探針與蔗糖反應(yīng)生成葡萄糖，通過(guò)便攜式血糖儀檢測(cè)生成的葡萄糖濃度可以實(shí)現(xiàn)對(duì)多巴胺的測(cè)定。本方法檢測(cè)的多巴胺濃度線性范圍為0.08-100μmol/L，檢測(cè)限為0.03μmol/L，且成功應(yīng)用于人體血清中多巴胺濃度的測(cè)定。
　　⑵基于肽特異性切割血糖儀高靈敏度測(cè)定前列腺特異性抗原的研究。以金納米粒

3、子修飾96孔板作為反應(yīng)平臺(tái)，生物素修飾的肽作為識(shí)別元素，蔗糖轉(zhuǎn)化酶修飾的鏈霉親和素包被磁珠作為探針，以血糖儀作為檢測(cè)儀器實(shí)現(xiàn)了高靈敏度測(cè)定前列腺特異性抗原的測(cè)定。本方法檢測(cè)前列腺特異性抗原濃度在80pg/mL到7 ng/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性，檢測(cè)限為30pg/mL。本方法被成功應(yīng)用于人體尿樣中前列腺特異性抗原濃度的測(cè)定。
　?、抢醚莾x和適體識(shí)別技術(shù)檢測(cè)沙門(mén)氏菌的研究。首先，將沙門(mén)氏菌適體固定在96孔板微孔中，以轉(zhuǎn)化酶修飾的

4、適體互補(bǔ)序列為探針，通過(guò)DNA雜交作用，將探針固定在96孔板微孔中。當(dāng)有目標(biāo)物沙門(mén)氏菌存在時(shí)，沙門(mén)氏菌與沙門(mén)氏菌適體發(fā)生識(shí)別作用，使轉(zhuǎn)化酶修飾的適體互補(bǔ)序列探針脫落，然后將脫落的探針溶液中加入果糖，在探針上轉(zhuǎn)化酶的作用下，將果糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖，利用葡萄糖儀為檢測(cè)儀器，實(shí)現(xiàn)對(duì)沙門(mén)氏菌的測(cè)定。方法的檢測(cè)限為320CFU/mL，另外，該方法對(duì)沙門(mén)氏菌的測(cè)定表現(xiàn)出了良好的選擇性。
　　⑷基于雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)信號(hào)放大技術(shù)測(cè)定赤霉素的研究。以磁珠為

5、載體，以抗體和DNA1修飾金納米粒子作為探針，通過(guò)雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)信號(hào)放大技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)赤霉素的化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定。當(dāng)目標(biāo)物赤霉素存在時(shí)，赤霉素與抗體修飾的磁珠、抗體和DNA1修飾的金納米探針形成三明治夾心免疫復(fù)合物，加入富含G堿基的發(fā)卡H1和H2后，探針上的DNA1誘導(dǎo)H1和H2發(fā)生雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在磁珠上形成雙鏈DNA結(jié)構(gòu)，然后，雙鏈DNA結(jié)構(gòu)中的G堿基在3,4,5-三甲氧基苯甲酰甲醛的作用下，瞬間的釋放光能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，根據(jù)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)對(duì)

6、赤霉素的測(cè)定。在最優(yōu)條件下，本方法檢測(cè)赤霉素的線性范圍為0.01 ng/mL到70 ng/mL，檢測(cè)限是0.003 ng/mL。方法表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性和選擇性。
　　⑸基于磁珠和DNA酶催化反應(yīng)化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)L-組氨酸的研究。以化學(xué)發(fā)光試劑標(biāo)記的L-組氨酸特異性識(shí)別序列的底物鏈作為信號(hào)探針；根據(jù)底物鏈序列設(shè)計(jì)DNA酶序列，并利用其修飾羧基化磁珠，通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)原理將信號(hào)探針固定在磁珠上，當(dāng)有目標(biāo)物L(fēng)-組氨酸存在時(shí)，標(biāo)記了化學(xué)發(fā)光