便攜式血糖儀在生化分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、過去便攜式血糖儀只是單純地被糖尿病患者用來檢測血液中葡萄糖濃度，最近的研究發(fā)現(xiàn)，通過蔗糖轉(zhuǎn)化酶的紐帶作用，便攜式血糖儀同樣可被用于檢測一些非葡萄糖目標(biāo)物。本文通過便攜式血糖儀檢測技術(shù)為檢測生物小分子提供了新的檢測手段和思路。主要內(nèi)容包括：
　　⑴基于DNA適體傳感血糖儀測定多巴胺的研究。將多巴胺適體序列DNA1固定在金納米粒子修飾的96孔板表面，再將適體互補序列DNA2和蔗糖轉(zhuǎn)化酶修飾金納米粒子制備的信號探針通過雜交反應(yīng)固定在DN

2、A1和金納米粒子修飾的96孔板表面，構(gòu)成多巴胺適體傳感器。當(dāng)有目標(biāo)物多巴胺存在時，多巴胺與適體DNA1相互作用，釋放出信號探針，釋放出的信號探針與蔗糖反應(yīng)生成葡萄糖，通過便攜式血糖儀檢測生成的葡萄糖濃度可以實現(xiàn)對多巴胺的測定。本方法檢測的多巴胺濃度線性范圍為0.08-100μmol/L，檢測限為0.03μmol/L，且成功應(yīng)用于人體血清中多巴胺濃度的測定。
　?、苹陔奶禺愋郧懈钛莾x高靈敏度測定前列腺特異性抗原的研究。以金納米粒

3、子修飾96孔板作為反應(yīng)平臺，生物素修飾的肽作為識別元素，蔗糖轉(zhuǎn)化酶修飾的鏈霉親和素包被磁珠作為探針，以血糖儀作為檢測儀器實現(xiàn)了高靈敏度測定前列腺特異性抗原的測定。本方法檢測前列腺特異性抗原濃度在80pg/mL到7 ng/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性，檢測限為30pg/mL。本方法被成功應(yīng)用于人體尿樣中前列腺特異性抗原濃度的測定。
　?、抢醚莾x和適體識別技術(shù)檢測沙門氏菌的研究。首先，將沙門氏菌適體固定在96孔板微孔中，以轉(zhuǎn)化酶修飾的

4、適體互補序列為探針，通過DNA雜交作用，將探針固定在96孔板微孔中。當(dāng)有目標(biāo)物沙門氏菌存在時，沙門氏菌與沙門氏菌適體發(fā)生識別作用，使轉(zhuǎn)化酶修飾的適體互補序列探針脫落，然后將脫落的探針溶液中加入果糖，在探針上轉(zhuǎn)化酶的作用下，將果糖轉(zhuǎn)化為葡萄糖，利用葡萄糖儀為檢測儀器，實現(xiàn)對沙門氏菌的測定。方法的檢測限為320CFU/mL，另外，該方法對沙門氏菌的測定表現(xiàn)出了良好的選擇性。
　　⑷基于雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)信號放大技術(shù)測定赤霉素的研究。以磁珠為

5、載體，以抗體和DNA1修飾金納米粒子作為探針，通過雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)信號放大技術(shù)實現(xiàn)對赤霉素的化學(xué)發(fā)光免疫測定。當(dāng)目標(biāo)物赤霉素存在時，赤霉素與抗體修飾的磁珠、抗體和DNA1修飾的金納米探針形成三明治夾心免疫復(fù)合物，加入富含G堿基的發(fā)卡H1和H2后，探針上的DNA1誘導(dǎo)H1和H2發(fā)生雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在磁珠上形成雙鏈DNA結(jié)構(gòu)，然后，雙鏈DNA結(jié)構(gòu)中的G堿基在3,4,5-三甲氧基苯甲酰甲醛的作用下，瞬間的釋放光能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，根據(jù)化學(xué)發(fā)光強度實現(xiàn)對

6、赤霉素的測定。在最優(yōu)條件下，本方法檢測赤霉素的線性范圍為0.01 ng/mL到70 ng/mL，檢測限是0.003 ng/mL。方法表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性和選擇性。
　?、苫诖胖楹虳NA酶催化反應(yīng)化學(xué)發(fā)光法檢測L-組氨酸的研究。以化學(xué)發(fā)光試劑標(biāo)記的L-組氨酸特異性識別序列的底物鏈作為信號探針；根據(jù)底物鏈序列設(shè)計DNA酶序列，并利用其修飾羧基化磁珠，通過堿基互補配對原理將信號探針固定在磁珠上，當(dāng)有目標(biāo)物L(fēng)-組氨酸存在時，標(biāo)記了化學(xué)發(fā)光